En el presente trabajo, utilizamos técnicas de microfabricación, simulaciones
numéricas, experimentos de electrofisiología para explorar la viabilidad en me-
jorar la interface ordenador-neurona a través de microcanales, y la biofísica para
la generación de señales en los dispositivos con microcanales. También demos-
tramos que los microcanales pueden ser usados como una técnica prometedora
con alto rendimiento en el muestreo automático de canales iónicos a nivel subce-
lular. Finalmente, se ha diseñado, fabricado y probado el micropozo-microcanal
como modificación adicional a los arreglos de multielectrodos, permitiendo una
alta ganancia en la relación señal/ ruido (en inglés Signal to Noise Ratio SNR),
y el registro de múltiples-lugares en poblaciones de baja densidad de redes neu-
ronales del hipocampo in vitro.
Primero, demostramos que son de alto rendimiento los microcanales de bajo
costo con interface neurona-electrodo, para el registro extracelular de la activi-
dad neuronal con baja complexidad, por periodos estables de larga duración y
con alta ganancia SNR.
En seguida, se realiza un estudio mediante experimentos y simulaciones nu-
méricas de la biofísica para la generación de las señales obtenidas de los dispositi-
vos con microcanales. Basados en los resultados, racionalizamos y demostramos
como es que la longitud del canal (siendo 200 μm) y la sección transversal del
microcanal (siendo 12 μm2) canaliza a los potenciales de acción para estar
dentro del rango de milivolts. A pesar del bajo grado de complexidad envuelto
en la fabricación y aplicación, los dispositivos con microcanales otorgan una sola
media de valor SNR de 101 76, lo cual es favorablemente comparable con la
SNR que se obtiene de desarrollos recientes que emplean electrodos curados con
CNT y Si-NWFETs.
Más aún, nosotros demostramos que el microcanal es una técnica promete-
dora para el alto rendimiento del muestro automático de canales iónicos a nivel
subcelular: (1) Información experimental y simulaciones numéricas sugieren que
las señales registradas sólo afectan los parches membranales localizados dentro
del microcanal o alrededor de 100 μm de las entradas del microcanal. (2) La
transferencia de masa de los componentes químicos en los microcanales fue ana-
lizada por experimentos y simulaciones FEM. Los resultados muestran que los
microcanales que contienen glía y tejido neuronal pueden funcionar como barre-
ra de fluido/química. Los componentes químicos pueden ser solamente aplicados
a diferentes compartimentos a nivel subcelular.
Finalmente, basado en simulaciones numéricas y resultados experimentales,
se propone que del micropozo-microcanal, obtenido de la modificación de MEA
(MWMC-MEA), la longitud óptima del canal debe ser 0,3 mm y la posición
1
óptima del electrodo intracanal, hacia la entrada más cercana del microcanal,
debe ser 0,1 mm. Nosotros fabricamos un prototipo de MWMC-MEA, cuyo hoyo
pasante sobre las películas de Polydimethylsiloxane (PDMS) fue microtrabajado
a través de la técnica de grabados reactivos de plasma de iones. La baja densidad
del cultivo (57 neuronas /mm2) en el MWMC-MEAs permitió que las neuronas
vivieran al menos 14 días, con lo que la señal neuronal con la máxima SNR
obtenida fue de 142.
2 / In this present work, we used microfabrication techniques, numerical simulations,
electrophysiological experiments to explore the feasibility of enhancing
neuron-computer interfaces with microchannels and the biophysics of the signal
generation in microchannel devices. We also demonstrate the microchannel
can be used as a promising technique for high-throughput automatic ion-channel
screening at subcellular level. Finally, a microwell-microchannel enhanced multielectrode
array allowing high signal-to-noise ratio (SNR), multi-site recording
from the low-density hippocampal neural network in vitro was designed, fabricated
and tested.
First, we demonstrate using microchannels as a low-cost neuron-electrode
interface to support low-complexity, long-term-stable, high SNR extracellular
recording of neural activity, with high-throughput potential.
Next, the biophysics of the signal generation of microchannel devices was
studied by experiments and numerical simulations. Based on the results, we
demonstrate and rationalize how channels with a length of 200 μm and channel
cross section of 12 μm2 yielded spike sizes in the millivolt range. Despite
the low degree of complexity involved in their fabrication and use, microchannel
devices provided a single-unit mean SNR of 101 76, which compares favourably
with the SNR obtained from recent developments employing CNT-coated electrodes
and Si-NWFETs.
Moreover, we further demonstrate that the microchannel is a promising technique
for high-throughput automatic ion-channel screening at subcellular level:
(1) Experimental data and numerical simulations suggest that the recorded signals
are only affected by the membrane patches located inside the microchannel
or within 100 μm to the microchannel entrances. (2) The mass transfer of
chemical compounds in microchannels was analyzed by experiments and FEM
simulations. The results show that the microchannel threaded by glial and neural
tissue can function as fluid/chemical barrier. Thus chemical compounds can
be applied to different subcellular compartments exclusively.
Finally, a microwell-microchannel enhanced MEA (MWMC-MEA), with the
optimal channel length of 0.3 mm and the optimal intrachannel electrode position
of 0.1 mm to the nearest channel entrance, was proposed based on numerical
simulation and experiment results. We fabricated a prototype of the MWMCMEA,
whose through-hole feature of Polydimethylsiloxane film (PDMS) was micromachined
by reactive-ion etching. The low-density culture (57 neurons/mm2)
were survived on the MWMC-MEAs for at least 14 days, from which the neuronal
signal with the maximum SNR of 142 was obtained.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:TDX_UPC/oai:www.tdx.cat:10803/52810 |
| Date | 15 December 2011 |
| Creators | Wang, Ling |
| Contributors | Jané Campos, Raimon, Claverol Tinturé, Enric, Universitat Politècnica de Catalunya. Departament d'Enginyeria de Sistemes, Automàtica i Informàtica Industrial |
| Publisher | Universitat Politècnica de Catalunya |
| Source Sets | Universitat Politècnica de Catalunya |
| Language | English |
| Detected Language | Spanish |
| Type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis, info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
| Format | 183 p., application/pdf |
| Source | TDX (Tesis Doctorals en Xarxa) |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess, ADVERTIMENT. L'accés als continguts d'aquesta tesi doctoral i la seva utilització ha de respectar els drets de la persona autora. Pot ser utilitzada per a consulta o estudi personal, així com en activitats o materials d'investigació i docència en els termes establerts a l'art. 32 del Text Refós de la Llei de Propietat Intel·lectual (RDL 1/1996). Per altres utilitzacions es requereix l'autorització prèvia i expressa de la persona autora. En qualsevol cas, en la utilització dels seus continguts caldrà indicar de forma clara el nom i cognoms de la persona autora i el títol de la tesi doctoral. No s'autoritza la seva reproducció o altres formes d'explotació efectuades amb finalitats de lucre ni la seva comunicació pública des d'un lloc aliè al servei TDX. Tampoc s'autoritza la presentació del seu contingut en una finestra o marc aliè a TDX (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant als continguts de la tesi com als seus resums i índexs. |
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