Antalet monoklonala antikroppar som används i läkemedel ökar kraftigt. Dessa läkemedel är dyra och risken för förfalskning är stor. Behovet att utveckla en metod för snabb och precis identifiering av monoklonala antikroppar är därför brådskande. För identifiering utfördes analyser med Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry (MALDI-ToF-MS), Capillary Gel Electrophoresis (CGE) and Capillary Zone Electrophoresis (CZE) på nio monoklonala antikroppar. Fokuset var att undersöka huruvida signifikanta fysiokemiska egenskaper och unika aminosyrasekvenser var närvarande och kunde urskiljas. Olika analyser med MALDI-ToF-MS användes till att både separera de monoklonala antikropparna baserat på dess fysiokemiska egenskaper, och annotera aminosyrasekvenser innehållande nyckelfragment. Med metoderna baserade på kapillärelektrofores uppnåddes också separation. CZE föredras framför CGE då mängden data som erhålls från CZE är större och provberedningen är enklare. Sammanfattningsvis utformades ett protokoll för identifieringsprocessen, vilket inleds med MALDI-ToF-MS-analyser av monoklonala antikroppar på reducerad form mot kända referenser. Därefter är en hypotes formulerad utifrån vilka antikroppar som ser mest lika ut. Slutligen analyseras dessa med CZE för fastställning av den monoklonala antikroppens identitet. / The number of monoclonal antibodies used in pharmaceuticals is increasing sharply. These medicines are expensive, and the risk of counterfeiting is high. The need to develop a method for rapid and precise identification of monoclonal antibodies is therefore urgent. For identification, analyses were performed with Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry (MALDI-ToF-MS), Capillary Gel Electrophoresis (CGE) and Capillary Zone Electrophoresis (CZE) on nine monoclonal antibodies. The focus was to investigate whether significant physiochemical features and unique amino acid sequences were present and could be distinguished. Various analyses with MALDI-ToF-MS were used to both separate the monoclonal antibodies based on their physicochemical properties and annotate amino acid sequences containing key fragments. With the methods based on capillary electrophoresis, separation was also achieved. CZE is preferred over CGE as the amount of data obtained from CZE is greater and sample preparation is simpler. In summary, an identification process protocol was designed and is initiated with MALDI-ToF-MS analyses of reduced-form monoclonal antibodies against known references. A hypothesis is then formulated based on which antibodies look the most similar. Finally, these are analysed by CZE to determine the identity of the monoclonal antibody.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UPSALLA1/oai:DiVA.org:kth-329977 |
| Date | January 2023 |
| Creators | Bengtsson, Sofia |
| Publisher | KTH, Proteinvetenskap |
| Source Sets | DiVA Archive at Upsalla University |
| Language | English |
| Detected Language | English |
| Type | Student thesis, info:eu-repo/semantics/bachelorThesis, text |
| Format | application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | TRITA-CBH-GRU ; 2023:203 |
Page generated in 0.0024 seconds