A hemoglobina (Hb) do anelídeo Glossoscolex paulistus é uma Hb extracelular gigante. Esta é constituída por quatro cadeias polipeptídicas a, b, c e d contendo o heme. As cadeias a, b e c formam um trímero mantido por ligações dissulfeto e a cadeia d é um monômero. Neste trabalho, as técnicas espectroscópicas de absorção ótica no UV-Vís, fluorescência e dicroísmo circular foram utilizadas para monitorar as mudanças produzidas na estrutura do monômero d na forma oxi da hemoglobina extracelular gigante de Glossoscolex paulistus (HbGp) em pH 7,0 e 9,0 devido à interação com surfactantes iônicos, dodecil sulfato de sódio (SDS), cloreto de cetiltrimetilamônio (CTAC) e neutro, polioxietileno lauril éter (BRIJ - 35). A interação entre surfactantes e proteínas globulares tem sido estudada através de uma variedade de técnicas espectroscópicas visando à obtenção de informações relevantes com respeito à relação estrutura-atividade das proteínas. Os resultados de fluorescência mostraram que na presença dos surfactantes, há um aumento do rendimento quântico, sendo que o maior aumento é verificado na interação com o surfactante catiônico CTAC, sugerindo que a proteína apresenta uma quantidade maior de sítios específicos carregados negativamente, como os resíduos aniônicos, glutamil e aspartil. Na interação do monômero d da HbGp com CTAC ocorreu a formação de espécie pentacoordenada em ambos os pHs. Para o sistema monômero da HbGp-SDS em pH 7,0 e 9,0, foi observada a oxidação do monômero d, caracterizada pela formação da espécie hemicromo. A interação do monômero d em pH 7,0 e 9,0 com CTAC, analisada pelos espectros de dicroísmo circular, indicaram uma perda não muito significativa da estrutura secundária. No entanto, para os surfactantes SDS e BRIJ-35 foi possível constatar uma perda menos acentuada em relação ao CTAC. / The annelid hemoglobin (Hb) of the Glossoscolex paulistus is a giant extracellular hemoglobin (Hb). It is constituted by four polypeptide a, b, c and d chains containing the heme. The chains a, b and c form a trimer maintained by disulfide bond and the d chain is a monomer. In this work, the spectroscopic techniques of UV-Vís optical absorption, fluorescence and circular dichroism were used to monitor the changes induced by ionic detergents sodium dodecyl sulphate (SDS), cetyltrimethylammonium chloride (CTAC) and neutral, ether lauryl polioxitelene (BRIJ-35) in the structure of the d monomer in the oxi form of the giant extracellular hemoglobin of Glossoscolex paulistus (HbGp) in pH 7.0 and 9.0. The interaction between surfactants and globular proteins has been studied through a range of spectroscopic techniques targeting the obtaining of prominent information with regard to the relation structure-activity of the proteins. The fluorescence results showed that in the presence of the surfactants a quantum yield increases, and the CTAC promoted the more significant effect, suggesting that the protein presents a larger quantity of specific negative sites, as the anionic residues, glutamil and aspartil. In the interaction of d monomer of the HbGp with CTAC occurred the formation of pentacoordinated species in both pHs. For system monomer of HbGp-SDS at pH 7.0 and 9.0, was observed by oxidation of d monomer, characterized by the formation of the species hemichrome. The interaction of d monomer at pH 7.0 and 9.0 with CTAC, analyzed by circular dichroism spectra, indicates the loss of secondary structure. However, for SDS and BRIJ-35 surfactants it is possible to detect the lower loss of secondary structure in relation to CTAC.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:teses.usp.br:tde-20082009-164607 |
| Date | 17 October 2008 |
| Creators | Julio Carlos Ribelatto |
| Contributors | Hidetake Imasato, Adelaide Faljoni Alario, Leila Maria Beltramini, Leonardo Marmo Moreira |
| Publisher | Universidade de São Paulo, Química Analítica, USP, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP, instname:Universidade de São Paulo, instacron:USP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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