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DISSERTAÇÃO Cybelle Emanuele da Silva.pdf: 2250513 bytes, checksum: 4e34e57e4474ad3663b48e9669c360e2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-20T19:41:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1
DISSERTAÇÃO Cybelle Emanuele da Silva.pdf: 2250513 bytes, checksum: 4e34e57e4474ad3663b48e9669c360e2 (MD5)
Previous issue date: 2016-02-24 / FACEPE / A busca por métodos que possibilitem o diagnóstico mais rápido e eficaz do infarto agudo do miocárdio é preponderante atualmente. Como possibilidade analítica mais atrativa, os imunossensores são uma grande tendência na área cardiológica. Entretanto, para o aperfeiçoamento destes dispositivos, buscam-se continuamente algumas estratégias, tais como o uso de nanomateriais e polímeros condutores com objetivo de obter uma plataforma sensora mais sensível, estável e reprodutível. Neste trabalho, um filme nanoestuturado de nanotubos de carbono e polipirrol foi desenvolvido sobre a superfície de um eletrodo de platina para detecção eletroquímica da troponina T cardíaca humana. O filme de pirrol (0,3M) e nanotubos de carbono (0,1 mg/mL) foram eletropolimerizados através da técnica de cronoamperometria (0,8 V) sobre a superfície sensora. Os grupos carboxílicos reativos do filme foram ativados para imobilização covalente dos anticorpos anti-troponina T. Os sítios livres não reativos foram bloqueados com uma solução de glicina (0,01 M). A técnica de voltametria cíclica em sonda redox foi empregada para caracterização do processo de construção da plataforma sensora. Nos resultados obtidos, a eletrossíntese do pirrol em conjunto com os nanotubos apresentou um aumento significativo na transferência de elétrons. O tempo de polimerização do filme sobre a interface do eletrodo foi otimizado quando o ensaio croamperométrico foi programado para 80 s no potencial de 0,8 V. O filme de pirrol e nanotubos apresentou uma boa estabilidade eletroquímica, com coeficientes de variação para os picos redox ≤ 5%. Uma vez confirmada à viabilidade do filme, ensaios para otimização da concentração do anticorpo imobilizado, tempo de imunoreação e transferência de carga foram realizados. Uma curva de calibração foi obtida para quantificação livre de marcação da troponina T em amostras limpas, utilizando a técnica de voltametria de pulso diferencial. O imunossensor alcançou uma boa linearidade (r=0,94; p<0,0001) com erro relativo menor do que 1%, apresentando um limite de detecção de 0,006 ng/mL para cTnT. Com a metodologia proposta foi possível desenvolver um filme nanoestruturado em uma única etapa de síntese para determinação da troponina T humana em níveis de importância clínica. / The search for methods that allow the fast and effective diagnosis of acute myocardial infarction is currently preponderant. As a more attractive analytical possibility, the immunosensors are a big trend in the field of cardiology. However, for the improvement of these devices, the search for some strategies such as the use of nanomaterials and conducting polymers is continuous in order to obtain a more sensitive, stable and reproducible sensor platform. In this work, a nanostructured film of carbon nanotubes and polypyrrole was developed on the surface of a platinum electrode for electrochemical detection of human cardiac troponin T. The pyrrole film (0.3M) and carbon nanotubes (0.1 mg/mL) were electropolymerized using the chronoamperometry technique (0.8 V) on the sensor surface. The reactive carboxylic groups of the film were activated for the covalent immobilization of anti-troponin T. The non-reactive free sites were blocked with a solution of glycine (0.01 M). The cyclic voltammetry technique in redox probe was used to characterize the process of construction of the sensor platform. In the results, the electrosynthesis of pyrrole in conjunction with the nanotubes had a increase in the electron transfer. The film’s polymerization time over the electrode interface was optimized when the chronoamperometric test was set to 80 s in the potential of 0.8 V. The pyrrole and nanotube film exhibited good electrochemical stability, with variation coefficients for the redox peaks ≤ 5%. Once confirmed the viability of the film, testing for optimization of the immobilized antibody concentration, immunoreaction time and charge transfer were performed. A calibration curve was obtained for quantification of the marking free troponin T in clean samples, using the technique of voltammetry differential pulse. The immunosensor achieved a good linearity (r = 0.94, p <0.0001) with less than 1% relative errors, presenting a detection limit of 0.006 ng/mL for cTnT. With the proposed methodology has been possible to develop a nanostructured film in a one-step synthesis for determination of human cardiac troponin T at clinical importance levels.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/24421 |
| Date | 24 February 2016 |
| Creators | SILVA, Cybelle Emanuele da |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/3335497739195055, DUTRA, Rosa Amalia Fireman |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Ciencias Biologicas, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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