Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal. / Le transport des molécules à travers les membranes est un processus cellulaire
fondamental. Les transporteurs ABC (pour ATP-binding cassette) sont des protéines
transmembranaires médiant le transport actif de substrats variés (peptides, ions, acides
aminés, antibiotiques, etc). Le gène ATMI de Saccharomyces cerevisiae code pour un
transporteur ABC de 690 acides aminés localisé dans la membrane interne de la
mitochondrie. La protéine Atml est une proche homologue de la P-glycoprotéine
impliquée dans la résistance aux agents anticancéreux. Il a été démontré qu'Atml est
essentielle pour la croissance des cellules, procurant ainsi un phénotype idéal pour l'analyse
fonctionnelle de ce transporteur. Nous utilisons une technique, appelée plasmid shuffling',
basée sur l'échange de plasmides par contre-sélection d'un plasmide portant le marqueur de
sélection URA3 en présence d'acide 5-fluoroorotique (5-F0A) pour étudier Atml. Nous
avons construit une souche haploïde de S. cerevisiae dans laquelle la copie chromosomique
du gène ATMI est excisée mais qui est viable grâce à la présence d'un plasmide URA3
portant une copie fonctionnelle du gène ATMI. Cette souche a été transformée avec une
banque d'allèles mutés d'ATM1 portés par un plasmide LEU2 et criblée pour des mutants
thermosensibles (ts) d'Atml après contre-sélection du plasmide URA3 sur 5-F0A. Trois
mutants ts d'Atml ont été isolés et les mutations causant le phénotype ts ont été identifiées
par séquençage de l'ADN. Des courbes de croissance de ces mutants ont été tracées,
démontrant une croissance normale à température permissive mais un arrêt de croissance
après quelques divisions à température restrictive. Nous avons produit des anticorps
polyclonaux anti-Atml qui nous ont permis d'étudier la protéine de type sauvage et celle
des trois mutants ts. Ces études ont révélé l'absence d'Atml seulement dans les
mitochondries des mutants ts à température restrictive. D'autre part, des expériences de coimmunoprécipitation ont démontré qu'Atml forme des homodimères et que cette
interaction est médiée par la partie C-terminale d'Atml, qui contient le domaine de liaison à
l'ATP. Nos expériences ont donc permis d'identifier des acides aminés importants pour la
fonction d'Atml ainsi qu'un domaine impliqué dans la structure quaternaire de ce
transporteur.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:umontreal.ca/oai:papyrus.bib.umontreal.ca:1866/32981 |
| Date | 10 1900 |
| Creators | Pelletier, Laurence |
| Contributors | Raymond, Martine |
| Source Sets | Université de Montréal |
| Language | fra |
| Detected Language | French |
| Type | thesis, thèse |
| Format | application/pdf |
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