REV1 is a DNA polymerase that is involved in the process of translesion synthesis, both as an enzyme and as a scaffolding protein. The BRCT domain of this protein has been extensively studied since it was found to play a role in the recruitment of REV1 to DNA. The objective of the first part of this study was to investigate the role of the N-terminal fragment of REV1, which contains the BRCT domain, in generation of point mutations, using two tissue culture-based assays: the imatinib- and ouabain-resistance assays. Resistance to imatinib and ouabain is generally due to point mutations in the BCR-ABL and ATP1A1 genes, respectively. In both assays, the N-terminal fragment of REV1 leads to a higher rate of resistance than the control. Analysis of imatinib-resistant clones suggests that the increase in resistance in cells overexpressing the N-terminal fragment of REV1 is indeed due to point mutations in the BCR-ABL gene. The objective of the second part of this study was to elucidate a possible mechanism for the increase in frequency of resistance to imatinib and ouabain in cells expressing the N-terminal fragment of REV1. Although the results from this section remain inconclusive, we hypothesize that this fragment could possibly dimerize with the wild-type REV1 protein in cells, thus increasing REV1 recruitment to DNA and increasing the rate of translesion synthesis. In the third part of the study, a phage display library was screened to find possible binding partners for the N-terminal fragment of REV1. However, results from this section require further study. / REV1 est une polymérase d'ADN qui participe au processus de synthèse de translésion comme une enzyme ainsi qu'un adapteur. Le domaine de BRCT de REV1 a été considérablement étudié. Ce domaine contribue au recrutement de REV1 à l'ADN. L'objectif de la première partie de cette étude est de déterminer le rôle de la région N-terminale de REV1 dans la production des mutations ponctuelles en utilisant des modèles de lignées cellulaires. Les modèles utilisés dans cette étude sont la résistance à imatinib et la résistance à ouabain. La résistance à imatinib et la résistance à ouabain sont souvent causées par des mutations ponctuelles dans les gènes BCR-ABL et ATP1A1, respectivement. Les résultats de ces expériences ont démontré que l'expression de la région N-terminale de REV1 cause une augmentation du taux de résistance dans les deux systèmes étudiés. De plus, les résultats suggèrent que l'augmentation du taux de résistance à imatinib dans les cellules qui expriment la région N-terminale de REV1 est due aux mutations ponctuelles. La deuxième partie de cette étude consistait à trouver un mécanisme qui pourrait contribuer à l'augmentation du taux de résistance à imatinib et à ouabain observée dans les cellules exprimant la région N-terminale de REV1. Les résultats de cette partie ne sont pas concluants; par contre, notre hypothèse est qu'il existe un mécanisme de dimérisation entre le REV1 endogène et la région N-terminale exprimée dans les cellules. Cette dimérisation pourrait ensuite élever le niveau de recrutement de REV1 à l'ADN et augmenter le taux de synthèse de translésion. Le troisième but de cette étude était de trouver des partenaires d'interaction avec la région N-terminale de REV1 en utilisant un "Phage Display Library". Par contre, les résultats de cette section doivent être étudié plus profondément.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LACETR/oai:collectionscanada.gc.ca:QMM.114433 |
| Date | January 2013 |
| Creators | Davoudi, Sayeh |
| Contributors | Alain Nepveu (Internal/Supervisor) |
| Publisher | McGill University |
| Source Sets | Library and Archives Canada ETDs Repository / Centre d'archives des thèses électroniques de Bibliothèque et Archives Canada |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation |
| Format | application/pdf |
| Coverage | Master of Science (Department of Biochemistry) |
| Rights | All items in eScholarship@McGill are protected by copyright with all rights reserved unless otherwise indicated. |
| Relation | Electronically-submitted theses. |
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