Retinoblastoma (RB) is a tumour-suppressing protein involved in many cellular functions including: cell cycle regulation, cellular differentiation and cell death. In the past, its function has been intrinsically linked to its role in the cell cycle, wherein it acts as a key regulator of the G1 to S-phase transition checkpoint. However, evidence has emerged in support of cell cycle-independent roles for RB. In particular, it has been demonstrated that RB plays an important role in promoting normal animal development and survival to adulthood, a function that is conserved between mammals and metazoans. This role has been extensively studied using RBF1, the Drosophila melanogaster homolog of mammalian RB. An outstanding question in this field is whether or not the mutation of RB results in tissue-specific biological outcomes that ultimately affect adult viability. The results of this research thesis suggest that the mutation RBF1 can lead to tissue-specific developmental defects; however, the defects observed did not affect the ability of animals in surviving to adulthood. For example, a male germline-specific phenotype was observed when RBF1 expression was absent from germ cells. Adult male flies in which RBF1 expression was absent from the germline were sterile. Upon closer inspection, changes in germ cell number and patterning in the testes were observed. As well, an increase in cyclin E expression in RBF1-null mutants suggested that germ cells were being arrested at an early stage of spermatogenesis. A role for RBF1 in the fly germline has not been previously investigated. Therefore, this research project has identified a novel function of RBF1 with respect to germline regulation. Additionally, this research thesis also aimed to investigate whether RB interacted with a subset of known RB-associating factors in a tissue-specific manner. While this question was not completely addressed by the research presented herein, phosphorylation of Serine 728 on RBF1 was detected in vivo. This site was previously investigated in vitro and was suggested to be a putative phosphorylation target by cyclin/Cdk complexes. Therefore, the data of this research thesis have demonstrated the potential for this site to be phosphorylated in vivo. Further experimentation is required in order to verify the authenticity of this site as an endogenous target of phosphorylation. Overall, the data presented in this research thesis provide new insight into the various roles of RBF1 and the manner in which it is regulated. / Le rétinoblastome (RB) est une protéine classifiée comme suppresseur de tumeur. Elle joue plusieurs rôles importants dans la cellule, incluant: la régulation du cycle cellulaire, la différentiation cellulaire et l'apoptose. Dès sa découverte, le rétinoblastome a été caractérisé par son rôle primaire en règlant le cycle cellulaire dans lequel RB fonctionne comme régulateur de la transition entre la phase G1 et la phase S. Depuis ce temps, d'autres rôles pour RB indépendents de son fonctionnement dans le cycle cellulaire ont été identifiés. Notamment, il a été démontré que RB joue un rôle important dans la promotion de processus de dévelopement normal dans l'animal et la survie jusqu'à l'âge d'adulte. La plupart des recherches concentrant sur ce rôle ont été faites en utilisant la Drosophile, une espèce modèle qui convient à la manipulation génétique et en laquelle l'homologue de RB se nomme RBF1.Il reste plusieurs questions à rechercher à propos du rôle de RBF1 concernant la survie de l'animal jusqu'à l'âge d'adulte. Cette thèse essaie de répondre à la question suivante; est-ce que les effets biologiques résultant de mutater RBF1 sont spécifiques à des tissus particuliers, et est-ce qu'ils ont un effet sur l'abilité de la Drosophila de survivre jusqu'au stage d'adulte? Les résultats de cette thèse indiquent qu'en mutant RBF1, il est possible de produire des effets biologiques unique dans des tissus spécifiques. Quand même, aucun de ces effets ont affecté la survie de l'animal. Par example, il a été démontré que RBF1 joue un rôle unique dans le tissu gonade des mâles. Dans des Drosophiles qui n'expriment pas RBF1 dans les cellules de la lignée germinale, les adultes mâles étaient stériles. En examinant les testicules, le phénotype des cellules de la lignée germinale était différent en comparaison au phenotype sauvage. Aussi, le nombre de cellules da la lignée germinale qui expriment la cycline E avait augmenté. Précédemment, il n'y avait pas d'études qui ont recherché un rôle pour RBF1 dans la lignée germinale des Drosphiles mâles; donc, les résultats de cette thèse ont démontré un rôle unique pour RBF1 en régularisant la spermatogenèse dans les Drosophiles.En plus, cette thèse essaie de répondre à une autre question liée à celle ci-haut: est-ce que RB s'associe avec des macromolécules particulières (dont il est déjà connue à faire des associations), mais d'une manière unique à chaque tissu de la Drosophile? Les données de cette thèse ne donnent pas une réponse complète à cette question, mais elles ont identifié in vivo un site de phosphorylation (Sérine 728) sur RBF1. Ce site a déjà été recherché et a été suggéré in vitro d'être une cible de phosphorylation par les complexes Cdk-cyclines. Alors, les données présentées ci-haut démontrent que Sérine 728 peut être phosphorylé in vivo aussi. Plus de recherche est requis pour vérifier si ce site est un cible authentique de phosphorylation endogène in vivo. En conclusion, les données de cette thèse démontrent de nouvelles façons de régler le fonctionnement de RBF1, et elles présentent des informations nouvelles à propos des rôles variés de RBF1 dans la Drosophile.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LACETR/oai:collectionscanada.gc.ca:QMM.119514 |
| Date | January 2013 |
| Creators | Brule, Veronique |
| Contributors | Nam Sung Moon (Internal/Supervisor) |
| Publisher | McGill University |
| Source Sets | Library and Archives Canada ETDs Repository / Centre d'archives des thèses électroniques de Bibliothèque et Archives Canada |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation |
| Format | application/pdf |
| Coverage | Master of Science (Department of Biology) |
| Rights | All items in eScholarship@McGill are protected by copyright with all rights reserved unless otherwise indicated. |
| Relation | Electronically-submitted theses. |
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