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Previous issue date: 2013-02-21 / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do estado de Minas Gerais (FAPEMIG) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (Capes) / Neste trabalho, foi realizado o desenvolvimento de um imunosensor para detec??o de anticorpos anti-Leishmania infantum. O princ?pio de transdu??o foi a Resson?ncia de Pl?smons de Superf?cie (SPR) e o sensor foi produzido atrav?s da imobiliza??o covalente de ant?genos sol?veis de Leishmania infantum sobre Monocamada Auto-Organizada (SAM) do ?cido 11-Mercaptoundecan?ico (11-MUA) ativado pela mistura contendo 100,0 mmol.L-1 de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC) e 150 mmol.L-1 de N-hidroxisuccinimida (NHS). Atrav?s das t?cnicas de Voltametria C?clica e Redu??o Dessortiva por Voltametria de Pulso Diferencial o processo de forma??o da SAM foi otimizado. Sob condi??es otimizadas, 1,0 mmol.L-1 da solu??o etan?lica de 11-MUA e 24 horas foram suficientes para a forma??o de uma SAM est?vel sobre a superf?cie de ouro. Para obten??o de informa??es complementares da SAM, foram realizados c?lculos da Cobertura de Superf?cie, Constante Diel?trica e Espessura do tiol adsorvido no substrato de ouro. Ap?s esta etapa, a adi??o de ant?genos sol?veis de L. infantum sobre a SAM foi acompanhada por SPR. As t?cnicas de Voltametria C?clica e Espectroscopia de Imped?ncia Eletroqu?mica foram usadas para caracterizar a imobiliza??o do ant?geno. Ap?s constru??o do imunosensor, foram adicionados em sua superf?cie soros caninos positivos para Leishmaniose Visceral, evidenciando varia??o significativa no ?ngulo de SPR, mostrando excelente sensibilidade da t?cnica para detec??o da intera??o ant?geno-anticorpo. Por outro lado, a adi??o dos soros negativos n?o foi acompanhada com resposta significativa, concluindo-se tamb?m que o imunosensor apresentou boa especificidade contra anticorpos anti-L. infatum. Portanto, neste trabalho foi desenvolvido com sucesso um sensor empregando SPR para detec??o em tempo real de anticorpos anti-L. infatum, apresentando grande perspectiva como sistema de sensoriamento da Leishmaniose Visceral em ?reas end?micas. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Qu?mica, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2012. / ABSTRACT
In this work, the development of an immunosensor for detection of anti-Leishmania infantum antibodies was performed. The principle of transduction used was the Surface Plasmon Resonance (SPR) and the sensor was constructed by covalent immobilization of soluble antigens of Leishmania infantum on self-assembled monolayers (SAMs) of 11-mercaptoundecanoic acid (11-MUA) which was activated by the mixture 100.0 mmol.L-1 1-ethyl-3 (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (EDC) and 150 mmol.L-1 N-hidroxisuccinimide (NHS). Cyclic Voltammetry and Dessortive Reduction by Differential Pulse Voltammetry techniques were employed in monitoring of SAM formation. Under optimized conditions, 1.0 mmol.L-1 of the 11-MUA in ethanolic solution and 24 hours were sufficient for the formation of a stable SAM on the gold surface. To obtain further information about the SAM, the Surface Coverage, Dielectric Constant and Thickness of the thiol film adsorbed on gold substrate were performed. After this step, the addition of soluble antigens?of L.?infantum?on the?SAM?was monitored?by SPR. Cyclic Voltammetry and Electrochemical Impedance Spectroscopy techniques were employed in characterization of antigen immobilization. After construction of immunosensor, positive canine serum for Visceral Leishmaniasis were added on its surface showing significant variation in the SPR angle, indicating excellent sensitivity of the technique for?antigen-antibody interaction detection. On the other hand, the addition of negative serum was not accompanied with a significant response, demonstrating that the immunosensor shows excellent specificity against anti-L infantum antibodies. Therefore, this work shows a successfully development of a SPR sensor for anti-L. infatum antibodies detection in real time, showing a great perspective as a sensing system of Visceral Leishmaniasis in endemic regions.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:acervo.ufvjm.edu.br/jspui:1/516 |
| Date | 21 February 2012 |
| Creators | Souto, D?nio Emanuel Pires |
| Contributors | Munoz, Rodrigo Alejandro Abarza, Luz, Rita de C?ssia Silva, Martins, Helen Rodrigues, Damos, Flavio Santos, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri (UFVJM), Damos, Fl?vio Santos |
| Publisher | UFVJM |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFVJM, instname:Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, instacron:UFVJM |
| Rights | A concess?o da licen?a deste item refere-se ao ? termo de autoriza??o impresso assinado pelo autor, assim como na licen?a Creative Commons, com as seguintes condi??es: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publica??o, autorizo a Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri e o IBICT a disponibilizar por meio de seus reposit?rios, sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei n? 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permiss?es assinaladas, para fins de leitura, impress?o e/ou download, a t?tulo de divulga??o da produ??o cient?fica brasileira, e preserva??o, a partir desta data., info:eu-repo/semantics/openAccess |
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