CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A vitrificaÃÃo do tecido ovariano antes de tratamentos gonadotÃxicos à uma alternativa para a preservaÃÃo da reserva folicular, visando o reimplante futuro e consequentemente, a restauraÃÃo da fertilidade feminina. No entanto, o processo de vitrificaÃÃo causa alguns danos que precisam ser minimizados. Desta forma, o objetivo desse estudo foi verificar o efeito da catalase e o Ãcido alfa lipÃico em diferentes concentraÃÃes para reduzir geraÃÃo de espÃcies reativas de oxigÃnio (ROS), visando obter menos danos sobre a morfologia e desenvolvimento folicular, densidade das cÃlulas do estroma, alteraÃÃes no DNA dos folÃculos prÃ-antrais ovinos, bem como atividade mitocondrial. Para isso, fragmentos de ovÃrios ovinos foram distribuÃdos em 9 tratamentos: (1) fresco ou controle; (2) incubado por 24h - INC; (3) vitrificados sem antioxidantes (SAA) ou na presenÃa de catalase (CAT) nas concentraÃÃes de (4) 10 - CAT10; (5) 20 - CAT20 ou (6) 40 - CAT40 UI/ml ou ainda na presenÃa de ALA nas concentraÃÃes de (7) 25 - ALA25; (8) 50 - ALA50 ou (9) 100 ALA100 ÂM/ml. ApÃs a vitrificaÃÃo todos os fragmentos foram aquecidos e tambÃm incubados por 24 horas e foram avaliados quanto à morfologia e desenvolvimento folicular, bem como quanto aos nÃveis de ROS no meio de incubaÃÃo. Posteriormente, apenas fragmentos dos grupos controle, INC, SAA, CAT40 e ALA100 foram analisados quanto à densidade das cÃlulas do estroma, danos no DNA (teste TUNEL e fosforilaÃÃo da H2AX), nÃveis de ROS e funÃÃo mitocondrial dos folÃculos no tecido ovariano. Os dados foram submetidos ao pacote estatÃstico SAS, e de acordo com o comportamento dos mesmos os testes foram escolhidos e aplicados, sendo as diferenÃas consideradas estatisticamente significativas quando P<0,05. Ao contrÃrio de outros tratamentos, a porcentagem de folÃculos morfologicamente normais no tecido ovariano vitrificado na presenÃa de ALA em todas as concentraÃÃes, nÃo diferiu do tecido fresco. A porcentagem de folÃculos em desenvolvimento foi maior em ALA 100 μM/mL do que aquelas encontradas no tecido incubado ou vitrificado com catalase (40 UI/mL) e ALA (25 ou 50 μM/mL). Entretanto, apesar do ALA na concentraÃÃo de 100 ÂM/mL ter mantido a atividade mitocondrial, nÃo foi suficiente para controlar a produÃÃo de ROS intracelular. O uso de catalase afetou significativamente os nÃveis de ROS (10 e 20 UI/mL), a densidade das cÃlulas do estroma, bem como o dano do DNA revelado por γH2AX (40 IU/mL). A vitrificaÃÃo de tecido ovariano ovino na presenÃa de 100 ÂM/mL de ALA preservou a morfologia, promoveu o desenvolvimento e causou menos danos ao DNA dos folÃculos prÃ-antrais. Apesar dos resultados satisfatÃrios do presente estudo, à fundamental a realizaÃÃo de novos estudos para definir a concentraÃÃo ideal de ALA, de modo a favorecer todos os parÃmetros avaliados. / Vitrification of ovarian tissue prior to gonadotoxic treatments is an alternative to preserve follicular reserve, with the aim of subsequent reimplantation and consequently, restoration of female fertility. However, the vitrification process causes some damage which should be minimize. Thus, Therefore, the objective of this study was to verify the catalase and alpha lipoic acid in different concentrations to reduce generation of reactive oxygen species (ROS), aiming to obtain less damage on follicular morphology and development, stromal cell density, alterations in the DNA, as well as mitochondrial activity of ovine preantral follicles. To achieved this objective, sheep ovarian fragments were distributed in 9 treatments: (1) fresh or control; (2) incubated for 24h (INC); (3) vitrified without antioxidants (SAA) or in the presence of catalase (CAT) at concentrations of (4) 10 - CAT10; (5) 20 - CAT20 or (6) 40 - CAT40 IU / ml or in the presence of ALA at concentrations of (7) 25 - ALA25; (8) 50-ALA50 or (9) 100 μM / ml (ALA100). After vitrification, all the fragments were warmed followed by incubation for 24 hours, finally, morphology and follicular development as well as ROS levels in the incubation medium were evaluated. Afterwards, the fragments of control, INC, SAA, CAT40 and ALA100 groups were analyzed for stromal cell density, DNA damage (TUNEL test and H2AX phosphorylation), ROS levels and mitochondrial function. The data were submitted to the statistical package SAS, and according to the behavior of the data and the differences were considered significant different when P <0.05. Unlike the other treatments, the percentage of morphologically normal follicles in the ALA groups with all the concentrations did not differ from the fresh tissue. Moreover, the percentage of developing follicles was higher in ALA100 than those found in the CAT40, ALA25 and ALA50 groups. However, whilst the treatment ALA100 maintained mitochondrial activity, it was not sufficient to control intracellular ROS production. In contrast, the treatments CAT10 and CAT20 significantly affected the ROS levels, stromal cell density as well as DNA damage revealed by γH2AX (CAT40). Additionally, the ovarian morphology was well preserved ALA100. It also promoted follicular development and caused less damage to the DNA of the preantral follicles. Despite the satisfactory results of the present study, it is fundamental to carry out new studies to define the ideal ALA concentration, in order to improve all the parameters evaluated.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:12207 |
| Date | 17 February 2017 |
| Creators | Luciana Mascena Silva |
| Contributors | Ana Paula Ribeiro Rodrigues, VirgÃnia ClÃudia Carneiro GirÃo, Carlos Eduardo AmbrÃsio |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em CiÃncias Morfofuncionais, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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