Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The optimization and validation of an analytical method for 51 pesticides determination in tomato, using UPLC-MS/MS, was developed in order to fulfill the requirement 5.4.5 (Method Validation) of the NBR ISO/IEC 17025:2005 and following the orientation document DOQ-CGCRE-008 (Orientation of analytical methods validation). This item is very important to a laboratory to be accredited by INMETRO (Brazilian accreditation body).
The method validation was carried out following all the validation parameters, such as linearity of the analytical curves, limits of detection and quantification, matrix effects, accuracy and precision of the method. The studied compounds in this work were determined by UPLC-MS/MS in the positive ESI ionization mode.
The stock solutions of the pesticides were prepared in organic solvent compatible with the compound solubility. These solutions were prepared by two different analysts in order to validate the preparation by comparing the areas of the injections (n=7) of each individual solution. After evaluation, 43 from 51 studied solutions showed results between the acceptable range of ± 10% demonstrating the satisfactory quality of solutions preparation.
The evaluated pesticides were extracted from tomatoes applying the mini Luke method with a mixture 1:1:1 (v/v/v) of each acetone/petroleum ether/dichloromethane solvent as extraction solvent. After extraction, the organic solvent extract was evaporate and reconstituted in appropriate solvent (acidified methanol with 0.1% acetic acid) for UPLC-MS/MS analysis.
The recovery experiments were done at 10, 20 and 50 μg kg-1 spike levels, by two analysts in different days, and 7 replicates (n=7) for each spike level plus the blank matrix (without pesticides). The limits of detection and quantification for the instrument and method were estimated, as well as the linearity of the analytical curves evaluated based on determination coefficient (r²), dynamic linear range, accuracy by recovery experiments (%), precision (RSD%) and matrix effect. From the 51 studied compounds, 46 showed recoveries between the range of 81 115% for all the evaluated spike levels. About precision, 92% of the compounds showed RSD% below 18.7% in the lowest spike level. The quantification limit of the method, for 82% from all evaluated compounds, was the lowest spike level studied (10 μg kg-1). The matrix effect observed was between ± 20% for all evaluated compounds, showing that there is not considerable suppression or enhancement in the analytes signal.
For all evaluated pesticides the intermediate precision was below 20% of RSD showing the good repeatability of the method. / O desenvolvimento e validação do método analítico para determinação de 51 agrotóxicos em tomate por UPLC-MS/MS foi realizado a fim de atender ao requisito 5.4.5 (Validação de Métodos) da norma NBR ISO/IEC 17025:2005 e seguindo o documento orientativo DOQ-CGCRE-008 (Orientação sobre validação de métodos analíticos). Esse item descrito na norma é de fundamental importância para que o laboratório possa ser acreditado pelo INMETRO.
A validação do método seguiu todos os parâmetros de validação, tal como a linearidade das curvas analíticas, limites de detecção e quantificação, efeito matriz, exatidão e precisão do método. Os agrotóxicos estudados neste trabalho foram determinados por UPLC- MS/MS no modo de ionização ESI positivo.
As soluções estoque dos agrotóxicos foram preparadas em solvente orgânico compatível com a solubilidade de cada substância. Essas soluções foram preparadas por dois analistas distintos a fim de validar o preparo dessas a partir da comparação das áreas das injeções realizadas (n=7) de cada solução individual. Após avaliação, 43 das 51 soluções estudadas mostraram resultados dentro da faixa de ± 10% demonstrando a excelente qualidade no preparo dessas soluções.
Os agrotóxicos estudados foram extraídos das amostras de tomate utilizando o método mini Luke o qual faz o uso de uma mistura 1:1: 1 (v/v/v) de acetona/éter de petróleo/diclorometano como solvente extrator. Após extração, o extrato em solvente orgânico foi evaporado e ressuspendido em solvente apropriado (metanol acidificado com 0,1% ácido acético) para análise por UPLC-MS/MS.
O estudo de fortificação e recuperação dos analitos foi realizado nas concentrações de 10, 20 e 50 μg kg-1, por dois analistas, e 7 replicatas (n=7) para cada concentração, além das amostras branco (sem conter os agrotóxicos). Os limites de detecção e quantificação do instrumento e do método foram determinados, bem como a linearidade das curvas analíticas avaliadas através do coeficiente de determinação (r²), faixa linear dinâmica de trabalho, exatidão através do estudo de fortificação e recuperação (%) dos analitos, precisão (RSD%) e efeito matriz. Dos 51 agrotóxicos estudados, 46 apresentaram recuperação média na faixa de 81 a 115 % para todas as concentrações avaliadas. Com relação à precisão, 92% dos agrotóxicos demonstraram RSD% abaixo de 18,7% na menor concentração de fortificação. O limite de quantificação do método, para 82% dos agrotóxicos, foi a concentração de fortificação mais baixa estudada (10 μg kg-1). O efeito matriz observado foi inferior a ± 20% para todos os agrotóxicos avaliados, demonstrando assim que não há supressão ou aumento considerável no sinal do analito.
Para todos os agrotóxicos estudados os resultados de precisão intermediária (onde foram avaliados diferentes analistas em diferentes dias) ficaram abaixo de 20% demonstrando a repetitividade satisfatória do método proposto.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsm.br:1/10557 |
| Date | 17 January 2014 |
| Creators | Dias, Jonatan Vinicius |
| Contributors | Pizzutti, Ionara Regina, Pizzolato, Morgana, Silva, Rosselei Caiél da |
| Publisher | Universidade Federal de Santa Maria, Programa de Pós-Graduação em Química, UFSM, BR, Química |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSM, instname:Universidade Federal de Santa Maria, instacron:UFSM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 100600000000, 400, 300, 300, 300, 300, 961b4a4a-1465-4d87-b4e8-6428b5a3ad38, 26686b5d-3746-4a6b-9e90-16646943cedd, 66c59a16-9960-4b13-b2c2-19d320689ac4, 76bfa5a6-c0a0-46b7-aac3-616d4fe00e63 |
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