Orientadora: Profa. Dra. Maria Aparecida Sperança / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2016. / A família Bunyaviridae agrupa virus de RNA trissegmentados de cadeia
negativa e inclui mais de 350 isolados classificados em cinco gêneros, Orthobunyavirus,
Hantavirus, Nairovirus, Phlebovirus e Tospovirus. Juntos, esses bunyavirus infectam uma
grande variedade de animais e plantas, e determinados vírus têm a capacidade de causar
doenças graves em seus respectivos hospedeiros. Depois da febre da Dengue, a doença
viral transmitida por artrópodes com maior prevalência no Brasil corresponde à febre
do Oropouche (FO), cujo agente etiológico é o arbovírus Oropouche (OROV) da família
Bunyarviridae, gênero Orthobunyavírus, grupo sorológico Simbu. Nos últimos anos,
OROV tem sido responsável por mais de 500.000 casos humanos em extensas e explosivas
epidemias na Região Amazônica e no Planalto Central. Com o intuito de buscar novas
ferramentas para o diagnóstico específico e tratamento da febre do Oropouche, este projeto
teve por objetivo investigar a forma recombinante da proteína do Nucleocapsídeo (N)
por meio de estudos estruturais. A proteína N dos bunyavirus é essencial para o processo
de replicação, apresentando mecanismo específico de encapsidação do genoma de RNA. O
gene que codifica a proteína N de OROV foi subclonada no vetor de expressão bacteriano
pET28a (+), com subseqüente expressão em bactéria E. coli da linhagem BL21 (DE3), em
diferentes condições de temperatura. Desenvolveram-se estudos estruturais com a análise
de espalhamento dinâmico de luz (DLS), Dicroísmo circular (CD), e de espalhamento de
raios X a baixos ângulos (SAXS). Os resultados indicaram que o monômero da proteína
N de OROV produzida em bactérias apresenta 28kDa com cauda de histidina, e após
purificação em condições nativas, apresentou alta massa molecular com tamanho entre
400-660 kDa, sugerindo a formação de multímero associado inespecificamente à molécula
de RNA com tamanho menor de 100 bases. / The Bunyaviridae family groups trissegmented RNA virus of negative strand
and includes more than 350 isolates classified into five genders, Orthobunyavirus, Hantavirus,
Nairovirus, Phlebovirus and Tospovirus. Together, these bunyavirus infect a variety
of animals and plants, and certain viruses have the ability to cause severe disease in their
hosts. After Dengue fever, the viral disease transmitted by arthropods with a higher
prevalence in Brazil corresponds to Oropouche fever (OF), whose etiologic agent is the
Oropouche virus (OROV) of Bunyarviridae family, Orthobunyavirus genus, and serologic
group Simbu. In recent years, OROV has been responsible for more than 500,000 human
cases in extensive and explosive epidemics in the Amazon region and in the Central
Highlands. In order to search for new tools for specific diagnosis and treatment of OF,
this project aimed to investigate the recombinant form of the nucleocapsid (N) protein by
means of structural studies. The N protein of bunyavirus is essential for the replication
process, and present a specific mechanism for encapsidation of the virus RNA genome.
The gene encoding the OROV N protein was subcloned into the bacterial expression vector
pET28a (+) with subsequent expression in E. coli strain BL21 (DE3) under different
temperature conditions. Structural studies have been developed with the dynamic light
scattering analysis (DLS), circular dichroism (CD), and X-ray scattering at low angles
(SAXS). The results indicated that the monomer OROV N protein with six histidine tag,
produced in bacteria, has 28kDa, and after purification under native conditions, showed
high molecular mass size between 400-660 kDa, suggesting multimer formation associated
nonspecifically to RNA molecules with a length less than 100 bases.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:BDTD:102476 |
| Date | January 2016 |
| Creators | Murillo, Juliana Londoño |
| Contributors | Sperança, Marcia Aparecida |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf, 66 f. : il. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFABC, instname:Universidade Federal do ABC, instacron:UFABC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=102476&midiaext=72679, Cover: http://biblioteca.ufabc.edu.brphp/capa.php?obra=102476 |
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