A crescente prevalência de hipertensão arterial na população mundial e os riscos por ela apresentados nas doenças coronarianas eleva a importância de seu controle. Sendo sua causa, frequentemente multifatorial, o tratamento da patologia é dificultado. Fatores ambientais associados à predisposição genética levam o indivíduo a apresentar índices pressóricos elevados de pressão arterial quando comparados a indivíduos que não apresentam tal predisposição. Identificar a predisposição genética seria ideal para amenizar ou, até mesmo, evitar o desenvolvimento da patologia. As nanopartículas estão cada vez mais associadas com biomoléculas, uma vez que suas propriedades associadas às questões médicas podem criar novos métodos potencialmente eficientes, tanto no diagnóstico como na terapêutica. O presente trabalho teve como objetivo a conjugação de nanopartículas de ouro, estabilizadas com dendrímero poli(amidoamina) de geração 4, com oligonucleotídeo para obtenção de genossensores capazes de detectar o polimorfismo de inserção e deleção do gene da enzima conversora de angiotensina I, o qual está intimamente relacionado com a predisposição à hipertensão arterial sistêmica. As nanopartículas foram caracterizadas por Microscopia Eletrônica de Transmissão (TEM), potencial zeta e Espectroscopia no Ultravioleta-Visível (UV-VIS). A formação do conjugado entre a nanopartícula e o oligonucleotídeo foi confirmada por UV-VIS, Espalhamento Dinâmico de Luz (DLS) e Espectroscopia no Infravermelho com Transformada de Fourier (FTIR). Foram construídos três sistemas de detecção diferentes, nos quais as técnicas empregadas foram Espectroscopia de Impedância Elétrica, Espectroscopia de Impedância Eletroquímica e Transistor de Efeito de Campo de Porta Estendida e Separada (SEGFET). O polimorfismo foi detectado em concentrações da ordem de 1 nM. Com destaque para aqueles em que o emprego do conjugado amplificou o sinal pelas propriedades das nanopartículas de ouro. Os genossensores propostos são promissores e futuramente poderão contribuir com a medicina preventiva. / The increasing prevalence of hypertension in the world population and the risks presented by it in coronary heart disease reveals the importance of their control. Due to its multifactorial causes, the treatment of this disease is difficult. Environmental factors associated with genetic predisposition lead the individual to present high indexes of blood pressure when compared to individuals who do not have a predisposition. To identify the genetic predisposition would be ideal to minimize or even to prevent the pathology development. Nanoparticles are increasingly associated with biomolecules, their properties added with medical questions, can create new methods potentially efficient, both in diagnosis and therapy. This study aims at developing of poly(amidoamine) dendrimer-stabilized gold nanoparticles, conjugated with oligonucleotides to obtain genosensors able to detect the polymorphism of insertion and deletion of angiotensin I converting enzyme (ACE) gene, which is closely related with the predisposition to systemic blood hypertension. The nanoparticles were characterized by Transmission Electronic Microscopy (TEM), Zeta potential and Ultraviolet-Visible Spectroscopy (UV-VIS). The formation of the conjugate formed by the nanoparticle and the oligonucleotide was confirmed by UV-VIS, Dynamic Light Scattering (DLS) and Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR). Three different detection systems were built, in which the following techniques were applied: Electrical Impedance Spectroscopy, Electrochemical Impedance Spectroscopy and Separative Extended Gate Field Effect Transitor (SEGFET). For all systems polymorphism - related sequences were detected at concentrations down to nanomolar. The use of the conjugate amplified the signal of the genosensor due to the nanoparticles. The proposed genosensors may contribute to preventative medicine.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-12082013-094430 |
| Date | 09 May 2013 |
| Creators | Rolim, Thalita Verônica Calheiros |
| Contributors | Zucolotto, Valtencir |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | Dissertação de Mestrado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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