Os microRNAs (miRNAs, miRs) são pequenos RNAs não codificadores presentes em diferentes organismos. Esses RNAs regulam a tradução de genes alvos por meio de ligação seqüência-específica a RNAs mensageiros (mRNAs). Dependendo do grau de complementaridade, podem inibir a tradução e/ou induzir a degradação desses mRNAs. No presente estudo, foi investigado por PCR em tempo real o padrão de expressão de quatro microRNAs (miR-21, -205, -342 e let-7a ) em quatro linhagens celulares derivadas de tumores da cavidade oral e da faringe (FaDu, Hep-2, SCC9 e UM-SCC-38), em queratinócitos orais normais e em amostras de tumor e margens cirúrgicas pareadas de 34 pacientes com carcinomas epidermóides de cabeça e pescoço (CECP). Foi também investigada a correlação da expressão dos MiRs de interesse com as características clinicopatológicas de pacientes com CECP. Nas linhagens celulares, os níveis dos miRs foram similares ou mais baixos que os de queratinócitos normais, ou os miRs não se expressaram. Somente o miR-342 mostrou níveis elevados na linhagem FaDu. Em células Hep-2 tratadas com estradiol, a expressão de miR-let-7a mostrou-se reduzida. Em tumores primários, níveis baixos de miR-let-7a foram observados em carcinomas de soalho de boca e laringe. A expressão de miR-21, -205 e -342 mostrou grande variabilidade entre as amostras e foi reduzida em um dos sítios anatômicos. Não foi observada correlação entre a expressão dos miRs e as características clinicopatológicas dos pacientes com CECP. A análise de três genes alvo candidatos (LYZ, MGLL e SPRR3) mostrou, em carcinomas de soalho de boca e laringe, associação positiva entre a expressão de miR-let-7a e de seu alvo predito MGLL, uma lipase que pode favorecer o fenótipo maligno aumentando os níveis de ácidos graxos livres e sinais lipídicos oncogênicos. O significado dessa associação não pode ser deduzida dos experimentos realizados pelo presente trabalho. / MicroRNAs (miRNAs, miRs) are small, non-coding RNAs present in different organisms. They regulate the translation of target genes through sequence specific binding to mRNA. Depending on the degree of sequence complimentary, they can inhibit translation and/or degradation of target mRNAs In the present study, we used real time PCR to investigate the expression pattern of four microRNAs (miR-21, -205, -342 e let-7a ) in four cell lines derived from tumors of oral cavity and pharinx (FaDu, Hep-2, SCC9 e UM-SCC-38), in normal oral keratinocytes and in matched tumor / surgical margin samples from 34 patients with head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). We also aimed to correlate the miR expression with the clinicopathological features in HNSCC. In cell lines, the miR levels were similar or lower than those in normal keratinocytes, or even absent. Only miR-342 showed high levels in FaDu cell line. In Hep-2 cells treated with estradiol, miR-let-7a expression was reduced. In primary tumors, low miR-let-7a levels were observed in floor of the mouth and larynx carcinomas. The expression of miR-21, -205 and -342 showed high variability between samples and was reduced in one anatomical site. No correlation was observed between miR expression and clinopathological features of head and neck cancer patients. The analysis of three potential target genes (LYZ, MGLL e SPRR3) showed, in floor of the mouth and larynx carcinomas, a positive correlation between the expression of miR-let-7a and its predicted target gene MGLL, a lipase that may support the malignant phenotype by increasing levels of free fatty acids and oncogenic lipid signals. The meaning of such association was not clear from our data.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-10062011-170455 |
| Date | 18 March 2011 |
| Creators | Sandoval, Flavio Trevisan Barbosa |
| Contributors | Silva, Eloiza Helena Tajara da |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | Dissertação de Mestrado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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