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Previous issue date: 2014-02-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Oxidative stress and premature sperm capacitation, generated during
cryopreservation of ram semen, reduces their viability, especially after cervical
insemination. The use of seminal plasma (SP) and negative pressure have
produced protection and the reversion of such damages. Two experiments
evaluated these potential enhancers of cryotolerance, and a third experiment
compared 2 methods of cervical AI. In experiment 1 ram semen was subjected
to the treatments: (TC) control or negative pressure of 200mBar (P200);
500mBar (P500) and 800mBar (P800). In experiment 2, the PS from rams,
stallions and bulls was lyophilized (L) and its protein measured. From each SP
600μg of protein per mL was aded to the freezing diluent used, compounding
the experimental groups: control (TC), ovine PS (PSLO), bovine PS (PSLB)
and equine PS (PSLE). Experiment 3 evaluated 2 methods of AI, the
superficial cervical AI (G1), and deep intrauterine or cervical AI with clamping
the vaginal fornix (G2). The in vitro data were subjected to ANOVA and test
T, and the pregnancy rate to the chi square test, all with 5% significance level.
In the experiment 1 higher progressive motility (PM) was observed in TC
(49%) compared to P200 (40.9%), P500 (38.9%) and P800 (38.9%) treatments.
In PM during the test the thermal resistance (TTR), MP after percoll (PP),
acrosome integrity (IAC), IAPP and membrane integrity (MI), there was no
difference between the groups. In cleavage rate P800 (34.5%) was less than
P200 (51.2%) and P500 (50.9%) did not differ from the control (44.3%). In
conclusion the P500 is the most appropriate for use in ram semen
cryopreservation, enabling high rates of cleavage after heterologous IVF,
maintain membrane integrity. Experiment 2 evaluated MP, MPPP and cleavage
rate after heterologous IVF in all groups, with the best group compared with
the control in: CASA system; acrossoma integrity (FITC-PSA), membrane
stability (M540), chromatin integrity (acridine orange), apoptosis (annexin)
and potential of mitochondria (Mitotracker). Also the PSLE showed higher
cleavage rate (71.37%), indicating a greater ability to oocyte penetration. The
PSLE showed higher VCL (PC-163.5μm/s, PSLE-186.2μm/s) and ALH (PC9μm PSLE-8.2μm) in CASA evaluation, compared to control. In flow
cytometry the annexin test revealed a greater amount of non-apoptotic viable
cells in PSLE (38.9%), compared to TC (32.1%). In experiment 3 there was no
difference in pregnancy rates after superficial (33.3%) or deep and intrauterine
(52.2%) IA, possibly due to the reduced number of animals used / O estresse oxidativo e a precoce capacitação espermática, gerados na
criopreservação do sêmen ovino, reduzem sua viabilidade, principalmente na
inseminação cervical. O uso de plasma seminal (PS) e a pressão negativa têm
produzido a proteção e reversão desses danos. Dois experimentos avaliaram
esses potenciais melhoradores da criotolerância, e um terceiro avaliou dois
métodos de IA cervical. No experimento 1 o sêmen ovino foi submetido aos
tratamentos: controle (TC), pressão de 200mBar (P200); 500mBar (P500) e
800mBar (P800). No experimento 2 o PS de carneiros, garanhões e touros foi
liofilizado (L) e sua proteína dosada. De cada PS, o equivalente a 600μg de
proteína por mL, foi adicionado ao diluente de congelamento, compondo os
grupos experimentais: controle (TC), PS ovino (PSLO), PS bovino (PSLB) e
PS equino (PSLE). O experimento 3 avaliou 2 métodos de IA, a cervical
superficial (G1) e a cervical profunda com pinçamento do fundo de saco
vaginal (G2). Os dados in vitro foram submetidos a análise de variância e teste
T, e a taxa de prenhez ao chi-quadrado, todos com significância de 5%. No
experimento 1, maior motilidade progressiva (MP) foi observada no TC (49%)
frente aos tratamentos P200 (40,9%), P500 (38,9%) e P800 (38,9%). Na MP
durante o teste de termo resistência (TTR), MP após percoll (PP), integridade
de acrossoma (IAC), IACPP, integridade de membrana (IM) e IMPP, não
houve diferença entre os grupos. Na clivagem P800 (34,5%) foi inferior a P200
(51,2%) e P500 (50,9%), não diferindo do controle (44,3%). Conclui-se que a
P500 é a mais adequada para uso com sêmen ovino, não reduzindo a
viabilidade após o congelamento e proporcionando elevada taxa de clivagem
após FIV heteróloga. O experimento 2 avaliou MP, MPPP e clivagem após
FIV heteróloga de todos os grupos, sendo o melhor grupo comparado ao
controle através de: sistema CASA, integridade de acrossoma (FITC-PSA),
estabilidade de membrana (M540); integridade de cromatina (acridina orange);
apoptose (anexina) e potencial de mitocôndria (mitotracker). O PSLE
apresentou a maior taxa de clivagem (71,37%), evidenciando sua maior
capacidade de penetração nos oócitos. Observou-se superioridade do PSLE nosparâmetros VCL (PC-163,5μm/s, PSLE-186,2μm/s) e ALH (PC-9μm, PSLE-
8,2μm) do CASA, em relação ao controle. Na citometria de fluxo, o teste da
anexina revelou maior quantidade de células viáveis não apoptóticas com o
PSLE (38,9%) em relação ao TC (32,1%). No experimento 3 não houve
diferença na prenhez após IA superficial (33,3%) e profunda (G2 52,2%),
possivelmente devido ao número reduzido de animais
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede.udesc.br #179.97.105.11:handle/907 |
| Date | 21 February 2014 |
| Creators | Casali, Renata |
| Contributors | Mezzalira, Alceu |
| Publisher | Universidade do Estado de Santa Catarina, Mestrado em Ciência Animal, UDESC, BR, Ciências Veterinárias |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UDESC, instname:Universidade do Estado de Santa Catarina, instacron:UDESC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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