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Clonagem e expressão de CipA (PMN_0325), um cristal intracitoplasmático de Photorhabdus luminescens linhagem MN7 em Escherichia coli. / Cloning and expression of CipA (PMN_0325), an intracytoplasmic crystal of Photorhabdus luminescens MN7 strain in Escherichia coli.

Photorhabdus luminescens MN7 é uma enterobactéria associada a seus simbionte, nematoides da espécie Heterorhabditis baujardi LPP7, coletada em Monte Negro (RO), Brasil. As bactérias do gênero Algumas linhagens de P. luminescens possuem no seu citoplasma dois cristais proteicos compostos das CIPs (Crystal Inclusion Proteins A e B). Na fase estacionária de crescimento esses cristais são até 40% do total de proteínas na célula. Fizemos uma estratégia para clonar e expressar a ORF completa dos genes que codificam CipA, CipB e CipB2 de MN7. Os três genes foram amplificados e subclonados, mas apenas CipA foi expressa em Escherichia coli. A proteína recombinante foi purificada em coluna de Níquel N2+ e utilizada para inóculo em camundongos Balb/c. CipB foi clonada no plasmídeo de expressão, mas não foi expressa quando induzida. CipB2 foi amplificada, mas não foi clonada no plasmídeo de expressão. Também foi amplificado e subclonado o fragmento de miniSOG (mini Singlet Oxygen Generator), para ser ligado aos genes das CIPs que foram clonados para ensaios de fluorescência. / Photorhabdus luminescens MN7 is an enterobacterium associated with its symbiont, nematodes of the Heterorhabditis baujardi LPP7 species, collected in Monte Negro (RO), Brazil. Bacteria of the genus of P. luminescens lineages do not have their cytoplasm two protein crystals composed of CIPs (Crystal Inclusion Proteins A and B). In the stationary phase of growth of the crystals are up to 40% of the total proteins in the cell. We have devised a strategy to clone and express a complete ORF of the genes encoding MN7 CipA, CipB and CipB2. All three genes were amplified and subcloned, but only CipA was expressed in Escherichia coli. The recombinant protein was purified on a Nickel N2+ column and used for inoculum in Balb / c mice. CipB was cloned without expression plasmid, but was not expressed when induced. CipB2 was amplified, but was not cloned without expression plasmid. The miniSOG (mini Singel Oxygen Generator) fragment was also amplified and subcloned to be linked to the genes of the CIPs that were so cloned for fluorescence assays.

Identiferoai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-15032018-114735
Date11 December 2017
CreatorsSilva, Marco Antonio Arantes da
ContributorsWinter, Carlos Eduardo
PublisherBiblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Source SetsUniversidade de São Paulo
LanguagePortuguese
Detected LanguageEnglish
TypeDissertação de Mestrado
Formatapplication/pdf
RightsReter o conteúdo por motivos de patente, publicação e/ou direitos autoriais.

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