CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Chemotherapy available for leishmaniasis is effective in many cases, however is still not satisfactory, presenting several inconveniences, one of them, resistance to antimony, which is a major current problems. Few studies using treatment with recombinant chemokines for leishmaniasis have been reported. The objective of this study was to evaluate the immunomodulatory effect in vitro of CXCL10 and its association with Glucantime for the infection of macrophages by Leishmania braziliensis strain refractory to treatment with antimony. For this, murine macrophages were infected with L. braziliensis and treated or not with CXCL10 (25, 50 e 100ng/mL), Glucantime (32mg/mL), and CXCL10+Glucantime [(25, 50 e 100ng/mL) + (32mg/mL)]. After 24 and 48h of infection were evaluated: parasitic load (macrophages infected count on coverslips stained), nitric oxide concentration (NO) and the pattern of the cytokines TNF-α, IL-12, IL-4, IL-10, and TGF-β in the culture supernatant. The results showed that the treatment with CXCL10 and CXCL10+Glucantime combination resulted in a significant reduction of the parasitic load, ranging from 70.5% to 95% and 92.4% and 95.0%, respectively, compared with the control untreated, while treatment with Glucantime decreased infection of macrophages to 74.0%. The reduction of the parasitic load was correlated with the increase of NO in all concentrations of CXCL10 (p <0.001). However, it was not observed the same dynamic when it was used to CXCL10+Glucantime association. TNF-α and IL-12 levels increased as a function of the concentration of CXCL10 in the first 24h, however, was inhibited when the infected macrophages were treated with Glucantime (p <0.05). The concentration of TNF-α was lower in cells treated with CXCL10+Glucantime than in those treated only with CXCL10 in both time periods. To the association CXCL10+Glucantime the IL-12 only induced a significant production within 24h when CXCL10 was used at a concentration of 100ng/ml (p <0.01). CXCL10 and association CXCL10+Glucantime treated cells showed a decrease of IL-4 concentration decreasing as the chemokine concentrations were higher (p <0.01) while treatment with Glucantime had a high production of this cytokine. In both times evaluated, treatment with CXCL10 induced IL-10 production at concentrations of 50ng/ml, and 100ng/ml, induced a 3-fold more IL-10 (p <0.001) when compared with antimony or with association CXCL10+Glucantime. TGF-β showed different behavior in the two time periods, an increase in the early hours, and fall in the past 48h. Glucantime induced TGF-β concentration higher than that induced by CXCL10. The association CXCL10+Glucantime showed increased production of TGF-β inverse of the concentration of CXCL10 used. In conclusion, in vitro treatment with CXCL10 induced a Th1 response profile (increase of TNF-α, and IL-12), controlling the intracellular parasitemia and modulation of the inflammatory response mediated by IL-10, in macrophages infected with L. braziliensis refractory to antimony. The Glucantime+CXCL10 association, although it has reduced parasitic load, not inducing a significant increase in nitric oxide, and showing a induction of TNF-α, IL-12 and reduction IL-4,. / A quimioterapia disponÃvel para as leishmanioses à eficaz em muitos casos, contudo ainda nÃo à satisfatÃria, apresentando vÃrias inconveniÃncias, uma delas, a resistÃncia aos antimoniais, que à um dos grandes problemas atuais. Poucos estudos utilizando tratamento com quimiocinas recombinantes para as leishmanioses tÃm sido relatados. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito imunomodulador in vitro de CXCL10 e sua associaÃÃo com Glucantime na infecÃÃo de macrÃfagos por cepa de Leishmania braziliensis refratÃria ao tratamento com antimÃnio. Para isso, macrÃfagos murinos foram infectados com L. braziliensis e tratados ou nÃo com CXCL10 (25, 50 e 100ng/mL), Glucantime (32mg/mL) e CXCL10+Glucantime [(25, 50 e 100ng/mL) + (32mg/mL)]. ApÃs 24 e 48h de infecÃÃo, avaliou-se: carga parasitÃria (contagem de macrÃfagos infectados em lamÃnulas coradas), concentraÃÃo de Ãxido nÃtrico (NO) e o padrÃo da citocinas TNF-α, IL-12, IL-4, IL-10 e TGF-β nos sobrenadantes das culturas. Os resultados mostraram que os tratamentos com CXCL10 e a associaÃÃo CXCL10+Glucantime resultaram em uma significante reduÃÃo da carga parasitÃria, variando entre 70,5% a 95% e 92,4% a 95,0%, respectivamente, quando comparado com o controle nÃo tratado, enquanto o tratamento com Glucantime apresentou reduÃÃo da infecÃÃo dos macrÃfagos de 74,0%. A reduÃÃo da carga parasitÃria foi correlacionada com o aumento de NO em todas as concentraÃÃes de CXCL10 (p< 0,001). No entanto, nÃo foi observada a mesma dinÃmica quando utilizado a associaÃÃo CXCL10+Glucantime. Os nÃveis de TNF-α e IL-12 aumentaram em funÃÃo da concentraÃÃo de CXCL10 nas primeiras 24h, no entanto, foi inibida quando os macrÃfagos parasitados foram tratados com Glucantime (p<0,05). A concentraÃÃo de TNF-α foi menor nas cÃlulas tratadas com CXCL10 + Glucantime do que naquelas tratadas somente com CXCL10 em ambos os tempos avaliados. Para IL-12 a assosciaÃÃo CXCL10+Glucantime sà induziu uma produÃÃo significante nas primeiras 24 h quando CXCL10 foi utilizado na concentraÃÃo de 100ng/ml (p<0,01). As cÃlulas tratadas com CXCL10 e associaÃÃo CXCL10+Glucantime apresentaram uma reduÃÃo da concentraÃÃo de IL-4, diminuindo à medida que as concentraÃÃes da quimiocina foram maiores (p<0,01), enquanto o tratamento com Glucantime apresentou uma elevada produÃÃo desta citocina. Em ambos os tempos avaliados, o tratamento com CXCL10 induziu a produÃÃo de IL-10 nas concentraÃÃes de 50ng/mL e 100ng/mL, uma induÃÃo 3 vezes mais de IL-10 (p<0,001), quando comparado ao antimÃnio ou com a associaÃÃo CXCL10+Glucantime. TGF-β mostrou comportamento diferente nos dois tempos avaliados, com aumento nas primeiras horas e queda nas Ãltimas 48h. Glucantime induziu concentraÃÃo de TGF-β superior Ãquela induzida por CXCL10. A associaÃÃo CXCL10+ Glucantime apresentou produÃÃo elevada de TGF-β inversa à concentraÃÃo de CXCL10 utilizada. Em conclusÃo, o tratamento in vitro com CXCL10 induziu um perfil de resposta Th1 (aumento de TNF-α e IL-12), com controle da parasitemia intracelular, e modulaÃÃo da resposta inflamatÃria mediada por IL-10, em macrÃfagos infectados por L. braziliensis refratÃria ao antimÃnio. A associaÃÃo Glucantime+CXCL10, embora tenha reduzido carga parasitÃria, nÃo induzindo aumento significante de Ãxido nÃtrico, mostrando uma induÃÃo de TNF-α, IL-12 e reduzindo IL-4.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:9558 |
| Date | 11 May 2015 |
| Creators | Naya LÃcia de Castro Rodrigues |
| Contributors | Josà Ajax Nogueira Queiroz, Alba Fabiola Costa Torres, Edson Holanda Teixeira, Zirlane Castelo Branco CoÃlho |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Patologia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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