Alicyclobacillus acidoterrestris são bactérias termoacidófilas esporofórmicas não patogênicas e estão comumente presentes em sucos de frutas ácidas, podendo deteriorá-los. Tendo em vista a importância da atividade agrícola e seus derivados no país, como suco de laranja industrializado, o interesse no desenvolvimento de técnicas bioanalíticas que propiciem uma detecção rápida, sensível e confiável, bem como alternativas para inativação desse microrganismo, é elevado. Neste trabalho foi testado o uso de saponina como agente inibidor de esporos e células vegetativas de A. acidoterrestris, em sucos de laranja concentrado e reconstituído. Entretanto, à temperatura ambiente a inibição é lenta, especialmente para esporos (cerca de 10 dias para inibição total), inviabilizando o seu uso na indústria de cítricos. A combinação de tratamento térmico e saponinas potencializaram a inibição da bactéria, o que torna possível sua aplicação industrial. A potencialização com temperatura alcançou 20% para esporos em suco concentrado, 28,5% para esporos em suco reconstituído e 45,1% para células vegetativas em sucos reconstituídos. A detecção da viabilidade celular foi realizada pela reação em cadeia da polimerase por transcrição reversa (RT-PCR), que se mostrou uma técnica rápida, sensível, e quantitativamente equivalente ao método padrão de detecção, o plaqueamento de culturas, sendo o coeficiente de correlação (r) entre as técnicas de 0,9977 para esporos e 0,9987 para células vegetativas. A quantificação dos produtos da RT-PCR foi realizada por eletroforese capilar em microchip com o equipamento Bioanalyzer 2100. O equipamento forneceu resultados confiáveis e reprodutíveis para diagnóstico de DNA transcrito de A. acidoterrestris. Além da alta sensibilidade, o equipamento permitiu um mínimo consumo de amostra (1 μL), praticidade e rapidez. / Alicyclobacillus acidoterrestris are termoacidophilic sporeforming nonpathogenic bacteria who are commonly present in acidic fruit juices and can deteriorate them. In view of the importance of agricultural activities in the country and its derivatives, such as industrialized orange juice the interest in the development of bioanalitycal techniques that provide early, sensitive, and reliable detection, as well as alternatives to inactivate the microorganism is elevated. This study tested the use of saponins as an inhibitor of spores and vegetative cells of A. acidoterrestris in both concentrate and reconstituted orange juices. At room temperature, however, the inhibition is slow, especially for spores (about 10 days for a total inhibition), preventing its use in the citrus industry. The combination of heat treatment and saponins potentiated the inhibition of bacteria, which makes possible their industrial application. Optimizing the temperature reached 20% for spores in juice concentrate, 28.5% for spores in reconstituted juice and 45.1% for vegetative cells in reconstituted juices. Detection of cell viability was performed by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), which showed to be a fast, sensitive, and quantitative equivalent to the traditional plating technique, and the correlation coefficient (r) between the techniques were 0.9977 and 0.9987 for spores and vegetative cells, respectively. The quantification of the products of RT-PCR was performed by capillary electrophoresis on microchip with Bioanalyzer 2100 equipment. The equipment provided reliable and reproducible results for the diagnosis of DNA transcript of A. acidoterrestris. Besides of high sensitivity, the equipment allowed minimal consumption of sample (1 μL) and provided convenience and speed of analysis.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-13112009-081713 |
| Date | 28 August 2009 |
| Creators | Alberice, Juliana Vieira |
| Contributors | Carrilho, Emanuel |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | Dissertação de Mestrado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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