Cette thèse a porté sur l’étude de la biosynthèse d’un lipopeptide antifongique, la mycosubtiline, produit par Bacillus subtilis ATCC6633 sous la forme d’un mélange d’isoformes qui varient selon la longueur et l’isomérie de leur chaine d’acide gras. La nature de l’acide gras influence l’activité biologique du lipopeptide. La corrélation entre la synthèse des isoformes de mycosubtiline et d’acides gras cellulaires a été étudiée en faisant varier des conditions de culture telles que l’osmolarité, la température et la source d’azote. Les variations du profil d’acides gras influencent dans la majorité des cas le profil des mycosubtilines obtenues confirmant le rôle important de ces précurseurs pour la synthèse du lipopeptide. Les effets de la modification génétique de deux gènes intervenant dans la synthèse de ces précurseurs ont été également caractérisés. La surexpression du gène ilvA codant pour la thréonine déshydratase et intervenant donc dans la synthèse de l’isoleucine augmente la synthèse de la mycosubtiline anteisoC17 alors que l’interruption d’un gène régulateur pléiotropique codY favorise la formation de la forme isoC16. Une souche monoproductrice constitutive de mycosubtiline, obtenue par optimisation génétique de la souche ATCC 6633 a également été caractérisée. Enfin, une première approche de purification des synthétases impliquées dans la synthèse de la mycosubtiline a été réalisée. Ces études ont contribuées à une meilleure compréhension des paramètres influençant « in vivo » cette synthèse, ainsi qu’à l’amélioration de la production de mycosubtiline, et à la définition des conditions optimales d’obtention des isoformes les plus actives. / This thesis is about the study of an antifungal lipopeptide , the mycosubtilin produced by Bacillus subtilis ATCC 6633 as a co-production of isoforms which vary according to the length and the isomery of the fatty acids chain (mostly nC16, isoC16, nC17, isoC17 and anteisoC17). The nature of fatty acid chain influences the biological activity of the lipopeptide. The relationship between the mycosubtilin isoforms synthesis and the fatty acids synthesis was studied by the variation of growth parameters like osmolarity, temperature and nitrogen source. The important role of fatty acids precursors for the lipopeptides synthesis was confirmed by the influence of fatty acids pattern variations on the mycosubtilines pattern. The effects of genetic modification of two genes involved in synthesis of fatty acids precursors were also characterized. The overexpression of ilA coding for threonine deshydratase, involved in isoleucine synthesis increase the mycosubtilin anteisoC17 production while the knock-out of the pleitropic regulator gene codY improves the isoC16 mycosubtilin synthesis. Moreover, a mycosubtilin constitutive monoproductive strain, obtained by genetic optimization of ATCC 6633 strain was also characterized. Then, a preliminary purification approach of synthetases implied in mycosubtilin synthesis was realized. Those studies contribute to a better understanding of parameters influencing in vivo synthesis as well as the improvement of mycosubtilin production and the definition of optimal conditions to obtain the most active isoforms.
Identifer | oai:union.ndltd.org:theses.fr/2013LIL10015 |
Date | 24 January 2013 |
Creators | Castéra-Guy, Joany |
Contributors | Lille 1, Jacques, Philippe, Coucheney, Françoise, Chihib, Nour-Eddine, Guez, Jean-Sébastien |
Source Sets | Dépôt national des thèses électroniques françaises |
Language | French |
Detected Language | English |
Type | Electronic Thesis or Dissertation, Text |
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