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Previous issue date: 2010-10-22 / The neosporosis is a disease caused by intracellular protozoa Neospora caninum,
which is of great importance, especially in cattle, because it may cause abortion in
infected animals, causing big economic losses for the cattle industry of many
countries in the world. In the present study it was reported the expression,
purification, and characterization of the protein NcSRS2 of N. caninum in the
methylotrophic yeast Pichia pastoris. The gene ncsrs2 was cloned in the vector of
expression pPICZαB, followed by the integration in the genome of yeast. The
recombining protein NcSRS2 was shown in the supernatant of the culture, where
later it was concentrated and purified. An indirect immunoenzymatic assay (ELISA)
was developed, using seronegative and seropositive of cattle and sheep, naturally
field-infected. It showed that the recombinant protein presented the antigenic
characteristics of native protein, which allowed its recognition by the blood serum of
different species of animals with neosporosis. The results were compared with the
indirect immunofluorescence (IFI). The diagnosis test ELISA- NcSRS2 described in
the present work is a specific and sensitive method for the detection of N. caninum in
cattle and sheep. The results indicate that the recombinant protein produced in this
work, can be used for the development of diagnosis methods with low-cost
production, and in industrial scale, because they are necessary and important for the
introduction of proper controlling measurements for this parasitosis in cattle flocks. / A neosporose é uma enfermidade causada pelo protozoário intracelular Neospora
caninum esta é de grande importância principalmente em bovinos, pois pode
ocasionar abortos nos animais infectados, causando grandes perdas econômicas
para indústria pecuária de vários países do mundo. No presente estudo, foi relatada
a expressão, purificação e a caracterização da proteína NcSRS2 de N. caninum na
levedura metilotrófica Pichia pastoris. O gene ncsrs2 foi clonado no vetor de
expressão pPICZαB seguindo de integração no genoma da levedura. A proteína
recombinante NcSRS2 foi demonstrada no sobrenadante da cultura onde
posteriormente foi concentrada e purificada. Um ensaio imunoenzimático indireto
(ELISA) foi desenvolvido utilizando soros negativos e positivos de bovinos e ovinos
naturalmente infectados a campo por N. caninum. Este demonstrou que a proteína
recombinante apresentou as características antigênicas da proteína nativa o que
permitiu o seu reconhecimento por soros de diferentes espécies de animais com
neosporose. Os resultados foram comparados com a imunofluorescência indireta
(IFI). O teste diagnóstico ELISA-NcSRS2 descrito no presente trabalho constitui um
método específico e sensível para a detecção de N. caninum em bovinos e ovinos.
Os resultados indicam que a proteína recombinante produzida neste trabalho pode
ser utilizada para o desenvolvimento de métodos diagnósticos com menor custo de
produção e em escala industrial, pois estes são necessários e importantes para a
implantação de medidas de controle adequadas para esta parasitose nos rebanhos
bovinos.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpel.edu.br:123456789/2348 |
| Date | 22 October 2010 |
| Creators | Pinheiro, Amanda Fernandes |
| Contributors | CPF:20732660025, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763076J5, Leite, Fabio Pereira Leivas |
| Publisher | Universidade Federal de Pelotas, Programa de Pós-Graduação em Parasitologia, UFPel, BR, Biologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPEL, instname:Universidade Federal de Pelotas, instacron:UFPEL |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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