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Previous issue date: 2011 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Nos últimos 15 anos, um grande esforço tem sido feito para uma maior utilização de
resíduos agroindustriais renováveis, podendo a biomassa lignocélulosica ser matéria
prima para os bicombustíveis. A composição dessas biomassas varia bastante, mas em
geral os substratos lignocelulósicos são constituídos de celulose (homopolímero de
glicose), hemicelulose (heteropolímero de hexoses e pentoses) e pela lignina
(compostos aromáticos). Considerando que a fermentação de glicose pode ser realizado
de forma eficiente, a bioconversão da fração das pentoses (xilose, principal açúcar
pentose obtido na hidrólise da hemicelulose), apresenta um desafio. A levedura Pichia
stipitis pode converter xilose a etanol com rendimentos industrialmente relevantes.
Porém necessita de condições limitantes de oxigênio, além do consumo da glicose inibir
de modo não competitivo a xilose e sob condições de crescimento similares o consumo
de glicose é maior que o de xilose. Com base na análise da via metabolica desta
levedura, o presente trabalho teve como objetivo redirecionar o fluxo metabólico da via
glicolitica para via das pentose fosfato dentro do que se chama modernamente de
Engeharia Metabólica. O gene PGI1 codificador da fosfoglicose isomerase foi
completamente removido do genoma da linhagem nativa NRRL 7124 com o uso de
fragmentos de PCR que continham seqüências com mais de 350 bp de homologia com
as regiões 5 e 3´ do gene alvo. Quando este gene foi deletado, a glicose-6-fosfato foi
inteiramente rotada para via da pentose fosfato. Este fluxo direciona a produção de
NADPH fundamental para a produção de precursores de nucleotídeos, aminoácidos, em
reações biossinteticas redutivas e também na conversão de xilose a xilitol. Para seleção
do transformante, foi necessária uma concentração de 1200μg/ml de Geneticina. Além
disso, a eficiência de transformação foi baixa, em parte devido à utilização do sistema
não convencional de códons por esta levedura. O cassete de deleção construído
apresenta a marca de seleção resistente a geneticina ladeado por duas regiões
denominadas loxp, que permitem a recombinação por sistemas de contra-seleção.
Possibilitando a remoção da marca de resistência
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/2068 |
| Date | 31 January 2011 |
| Creators | MIRANDA, André Ribas de |
| Contributors | MORAIS JÚNIOR, Marcos Antônio de |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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