Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Pythium insidiosum is an aquatic oomycete that is the causative agent of pythiosis,
an important disease in humans and animals that is prevalent in tropical and subtropical areas.
In Brazil it was first reported in 1974, then several cases this disease has been reported
throughout the country. The failure in the antifungal therapy combined with cases
unresponsive to immunotherapy existing, lead to molecular studies in order to investigate
possible genetic variations among Brazilian isolates, and this may be able to contribute on the
research for the improvement of immunotherapy available. Thus, this study aimed to evaluate
the genetic diversity of thirty P. insidiosum isolates from different regions of Brazil, and
compare all of them with isolates from Thailand, one isolate from Central America and
another isolate from North America, by sequencing and the analysis of genomic DNA regions
corresponding to cytochrome c oxidase (COX II) and ITS1, 5.8S rRNA and ITS2 rDNA
(ITS). The analyses of nucleotide sequences of both regions were carried out, individually and
in combination, using the following methods: Maximum parsimony (MP); Neighbor-joining
(NJ); Maximum likelihood (ML); and Bayesian analysis (BA). Our data demonstrated all of
P. insidiosum isolates as monophyletic in relation to the other Pythium species. Analises of
COX II gene sequences subdivided P. insidiosum isolates into three groups, whose
arrangement provides the Thai isolates as paraphyletic in relation to the Brazilian isolates.
The molecular analyses performed in this study suggest an evolutionary proximity among all
of American isolates, including the Brazilian, from Costa Rica and from the United States,
that were grouped in a single group. COX II gene network analysis showed signs of a recent
expansion of P. insidosum isolates, probably originated from the Asiatic to America
continent. By analysis of COX II gene demonstrated the highest levels of genetic variability
among P. insidiosum isolates studied in here, additionally, the highest levels of phylogenetic
information were shown, when it was compared to the ITS region analysis. Nevertheless, both
genetic markers selected for this study proved to be entirely congruent in the phylogenetic
relations among Brazilian isolates of P. insidiosum, since clustered all of them into a single
monophyletic group which did not shown to have genetic variability. The results indicate that
the strain used in the production of the immunotherapic - Pitium-Vac
®
- is representative of
the Brazilian isolates of P. insidiosum. / O Pythium insidiosum é um oomiceto aquático causador da pitiose, uma importante
enfermidade em humanos e animais, sendo prevalente em áreas tropicais e subtropicais. No
Brasil foi relatada pela primeira vez em 1974. Desde então vários casos desta enfermidade
tem sido descritos por todo o país. Os insucessos de terapias antifúngicas aliados aos casos
não responsivos à imunoterapia existente impulsionam estudos moleculares a fim de
investigar possíveis variações genéticas entre os isolados brasileiros de forma a contribuir nas
pesquisas para a melhoria do imunoterápico disponível. Assim, o presente estudo teve por
objetivo avaliar a diversidade genética de 30 isolados de P. insidiosum provenientes de
diferentes regiões do Brasil, bem como compará-los com isolados tailandeses, um isolado da
América Central e outro isolado da América do Norte através do sequenciamento e das
análises das regiões do DNA genômico correspondentes à citocromo c oxidase (COX II) e
ITS1, 5.8S rRNA e ITS2 do rDNA (ITS). As análises das sequências de nucleotídeos de
ambas as regiões foram realizadas, individualmente e em combinação, utilizando as seguintes
metodologias: máxima parcimônia (Maximum parsimony, MP); Neighbor-joining (NJ);
máxima verossimilhança (Maximum likelihood, ML); e análise Bayesiana (Bayesian analysis,
BA). Os dados demonstraram que todos os isolados de P. insidiosum são monofiléticos em
relação às outras espécies de Pythium. A análise das sequências do gene COX II subdividiu os
isolados de P. insidiosum em três grupos, cuja disposição demonstra os isolados tailandeses
como parafilético em relação aos isolados brasileiros. As análises moleculares realizadas
neste estudo sugerem uma proximidade evolutiva entre todos os isolados americanos,
incluindo os brasileiros, da Costa Rica e dos Estados Unidos, os quais foram agrupados juntos
em um único grupo. Na análise de network do gene COX II os resultados apresentaram sinais
de uma recente expansão dos isolados de P. insidosum para a América, provavelmente
oriundos do continente asiático. Pela análise do gene COX II foi possível evidenciar os
maiores níveis de variabilidade genética entre os isolados de P. insidiosum avaliados, além
disso, foram demonstrados os maiores níveis de informação filogenética, quando comparada à
análise da região ITS. Contudo, os dois marcadores genéticos selecionados para este estudo
revelaram-se inteiramente congruentes nas relações filogenéticas entre os isolados brasileiros
de P. insidiosum, reunindo-os em um único grupo monofilético o qual não demonstrou haver
variabilidade genética. Os resultados obtidos indicam que a cepa utilizada na produção do
imunoterápico Pitium-Vac
®
é representativa dos isolados brasileiros de P. insidiosum.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsm.br:1/8953 |
| Date | 15 July 2011 |
| Creators | Azevedo, Maria Isabel de |
| Contributors | Santurio, Janio Morais, Leal, Daniela Bitencourt Rosa, Loreto, érico Silva de |
| Publisher | Universidade Federal de Santa Maria, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, UFSM, BR, Farmacologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSM, instname:Universidade Federal de Santa Maria, instacron:UFSM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 201000000000, 400, 500, 300, 500, 500, 06a1b29c-fde0-4a69-8097-2a9d6a9d9649, 81087730-2239-428b-ad21-591665a7aecf, 2dbfa8b1-3511-410e-8203-4bb0cf639ac8, ea251119-5531-432f-bf54-8c8111248727 |
Page generated in 0.0025 seconds