Orientador: Gisele Faria / Resumo: As cistatinas são inibidores naturais de cisteíno proteases e desempenham um papel crítico no controle da degradação de proteínas. As cistatinas de plantas, dentre elas a cistatina produzidas de forma recombinante a partir da Citrus sinensis (CsinCPI-2), têm mostrado potencial para serem usadas em diferentes abordagens terapêuticas. Os objetivos deste estudo foram avaliar a citocompatibilidade e o efeito da fitocistatina CsinCPI-2 sobre a proliferação, migração e diferenciação osteogênica de células da polpa dental humana (hDPCs). Previamente à realização dos ensaios, as hDPCs foram caracterizadas quanto a expressão de marcadores de células tronco mesenquimais por meio de citometria de fluxo. hDPCs expostas à CsinCPI-2 e não expostas (controle) foram avaliadas quanto à viabilidade celular por meio dos ensaios de metiltiazol tetrazólio (MTT) e alamar blue, apoptose por meio de citometria de fluxo, atividade da fosfatase alcalina (ALP) por meio do cálculo da liberação de timolfitaleína, produção de nódulos mineralizados por meio de coloração com vermelho de alizarina, migração celular pelo ensaio de transwell, proliferação por meio de ensaio de incorporação de bromodeoxiuridina (BrdU) e expressão gênica de proteína morfogenética óssea 2 (BMP-2), fator de transcrição osteogênica (RUNX2), fosfatase alcalina (ALP), osteocalcina (OC), sialoproteína óssea (BSP) e proteína da matriz da dentina (DMP-1) por meio da reação da polimerase em cadeia em tempo real quantitativa (qPCR).Os dad... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cystatins are natural inhibitors of cysteine proteases and play a critical role in controlling protein degradation. Plant cystatins, among them a cystatins recombinantly produced from Citrus sinensis (CsinCPI-2), have shown potential to be used in different therapeutic approaches. The objectives of this study were to evaluate the cytocompatibility and effect of phytocystatin CsinCPI-2 on the proliferation, migration and osteogenic differentiation of human dental pulp cells (hDPCs). Previously to the performing the assays, hDPCs were characterized for the expression of mesenchymal stem cell markers by flow cytometry. hDPCs exposed to CsinCPI-2 and unexposed (control) were evaluated from cell viability by the methylthiazole tetrazolium (MTT) and alamar blue assays, apoptosis by flow cytometry, alkaline phosphatase (ALP) activity by calculation of thymolphtalein release, production of mineralized nodules by alizarin red staining, migration cells by Transwell assay, proliferation by bromodeoxyridine (BrdU) incorporation assay and gene expression of bone morphogenetic protein 2 (BMP-2), transcription factor (RUNX2), alkaline phosphatase (ALP), osteocalcin (OC), bone sialoprotein (BSP) and dentine matrix protein -1 (DMP-1) by quantitative real time PCR (qPCR). The data were analyzed by one-way analysis of variance (ANOVA) and Turkey post-test, two-way ANOVA and Bonferroni post-test or t-test (α = 0.05). hDPCs used in assays showed positive marking for mesenchymal stem cells (CD105,... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UNESP/oai:www.athena.biblioteca.unesp.br:UEP01-000928618 |
| Date | January 2019 |
| Creators | Viola, Kennia Scapin. |
| Contributors | Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho" Faculdade de Odontologia (Campus de Araraquara). |
| Publisher | Araraquara, |
| Source Sets | Universidade Estadual Paulista |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | text |
| Format | f. |
| Relation | Sistema requerido: Adobe Acrobat Reader |
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