Protozoários do gênero Trypanosoma infectam milhões de pessoas todo ano e coletivamente contribuem muito para as misérias humanas, pois são causa de muitas das doenças negligenciadas tropicais. Várias vias metabólicas essenciais são encontradas nesses parasitas tornando-os particularmente atrativos para investigações moleculares. Mecanismos de controle pós-transcricional tem sido alvo de estudo por sua peculiaridade nesses organismos. Nesse cenário, proteínas da classe das poli-A-binding proteins (PABP) possuem função no início da tradução, turnover do mRNA e interação com o 5´-CAP. Nesse trabalho foi identificada a homóloga poli-A binding protein 1 (PABP1) de Trypanosoma brucei. O silenciamento do gene pabp1 revelou que a ausência da proteína é letal ao parasita, comprovando sua essencialidade nesse organismo. Da mesma maneira, na ausência da proteína observou-se erro no processamento do mRNA sugerindo possível função nos eventos de cis e trans splicing. Sua localização subcelular foi avaliada indicando localização citoplasmática, bem como o são suas homólogas. No citoplasma, a proteína apresenta-se em estrutura reticulada, co-localizada com proteínas de retículo endoplasmático. Porém, sob estresse induzido a proteína relocaliza para o compartimento nuclear, indicando ser uma proteína com trânsito núcleo-citoplasma ainda não demonstrada na literatura. As funções identificadas sugerem a existência de um sub-complexo a 3´ do mRNA que acopla poliadenilação e splicing. Além disso, a relocalização nuclear parece ocorrer em resposta a estímulo externo, sugerindo que a relocalização do mRNA para o núcleo pode ser uma estratégia da célula para modular sua resposta gênica frente a variações do ambiente. / Protozoa of the genus Trypanosoma infect millions of people every year and collectively contribute to the human misery by causing several neglected tropical diseases. Several intriguing molecular pathways are found in these parasites also, rendering them particularly attractive for biochemical investigation. This unique eukaryotic cells lack mechanisms to control gene expression at the transcriptional level, they mostly control protein synthesis by posttranscriptional regulation process. Several RNAs and proteins are involved in this process, including poly(A) binding proteins. The poly(A)- binding protein of eukaryotes plays a role in polyadenylation, translation initiation and metabolism of mRNA. In this work the poly(A) binding protein 1 (PABP1) was identified in Trypanosoma brucei. Depletion of TbPABP1 showed its essential role in the procyclic form of the parasite. Immunofluorescence assays showed localization in the cytosolic compartment despite of its functions in cis and trans splicing as shown by RNA analysis of cells free from PABP1. As it was shown in the homologs, PABP1 it´s not only a cytosolic protein but it shuttles between the nucleus and the cytoplasm. Together with the literature, these results suggest an active complex in the 3´ end of the mRNA which works in synchrony with the splicing and capping machinery implying PABP1 as possible link between these processes.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-01032012-104711 |
| Date | 19 December 2011 |
| Creators | Dotta, Maria Amélia Villela Oliva |
| Contributors | Thiemann, Otavio Henrique |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | Tese de Doutorado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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