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Previous issue date: 2015-02-26 / CNPQ / Lectinas são proteínas ou glicoproteínas de origem não imunológica, que aglutinam células e precipitam carboidratos e seus derivados sem alterar suas estruturas covalentes. Neste trabalho foram extraídas 2 lectinas de Libidibia ferrea, planta com ampla distribuição no Brasil e conhecida vulgarmente como pau-ferro, uma lectina foi extraída da vargem de Libidibia ferrea var. ferrea (LifeFPL) e outra da entrecasca da Libidibia ferrea var. leiostachya Benth (LifeLBL), O processo de obtenção das lectinas puras incluem: a extração das farinhas (vagens ou entrecascas) em NaCl 0,15 M, fracionamento salino com sulfato de amônio, e cromatografia de afinidade em quitina. Para a LifeFPL, que já foi previamente purificada e caracterizada, foi determinada a presença de uma atividade coagulante de partículas em água. Quando incubada com o Caolin, LifeFPL apresentou atividade semelhante ao controle positivo, sulfato de alumínio, apresentando uma melhora significativa desta atividade quando o pH do meio encontra-se básico e diminuindo sua atividade coagulante na presença de íons. LifeLBL (lectina da entrecasca de Libidibia ferrea var. leiostachya) foi caracterizada parcialmente através de ensaios da inibição da atividade hemaglutinante, eletroforese (PAGE-SDS e 2D) e estudos de fluorescência, além disso, realizou-se o perfil fitoquímico de preparações da planta e determinou-se a atividade antioxidante dessas preparações e a afinidade a ácidos húmicos (AHu). Houve uma diminuição significativa da AH de LifeLBL na presença de ácido húmico. A LifeLBL continuou ativa após aquecimento à 100 ºC e apresentou duas bandas por SDS-PAGE e cromatografia em gel filtração em Superdex 75-30 revelou dois picos proteicos com 19 e 15 kDa. Na eletroforese 2D a massa molecular estimada foi de 20 e 15 kDa e o pI de 4,53 e 5,14. A AH de LifeLBL foi inibida parcialmente por N-acetil-Dglicosamina e totalmente por albumina bovina serica. Em relação aos AHu, a LifeLBL teve sua afinidade por ácido húmico aumentada quando alcalinizado o meio e reduzida na presença de íons metálicos, provavelmente por modificação estrutural do AHu. Os testes fitoquímicos revelaram que as amostras lectínicas da entrecasca de L. ferrea var. leiostachya Benth apresentaram: proantocianidinas condensadas, taninos hidrossolúveis e flavanóide, sendo que a amostra purificada por cromatografia de afinidade em quitina foi isenta de componentes do metabolismo secundário. Em conclusão, uma lectina, termoestável (LifeLBL) foi parcialmente inibida por N-acetil-D-glicosamina e ácido húmico, sendo obtida da entrecasca de L. ferrea por cromatografia de afinidade em quitina. LifeLPL foi capaz de coagular partículas de caolin em suspensão em água. Os resultados obtidos neste trabalho reforçam a importância de se caracterizar proteínas e ensaiar suas propriedades biológicas. / Lectins are proteins or glycoproteins of non-immunological origin, which bind cells and precipitate carbohydrates and their derivatives without changing their covalent structures. In this work two lectins were extracted from Libidibia ferrea, a plant widely distributed in Brazil and commonly known as ironwood, a lectin was extracted from the Libidibia ferrea var. Ferrea (LifeFPL) and another of the bark of Libidibia ferrea var. Leiostachya Benth (LifeLBL), The process of obtaining pure lectins includes: extraction of flours (pods or skim) in 0.15 M NaCl, saline fractionation with ammonium sulfate, and chitin affinity chromatography. For LifeFPL, which was previously purified and characterized, the presence of a coagulant activity of particles in water was determined. When incubated with Caolin, LifeFPL presented similar activity to the positive control, aluminum sulfate, showing a significant improvement of this activity when the pH of the medium is basic and decreasing its coagulant activity in the presence of ions. LifeLBL (Libidibia ferrea var. Leiostachya) lectern was partially characterized by inhibition of hemagglutinating activity, electrophoresis (PAGE-SDS and 2D) and fluorescence studies, and the phytochemical profile of plant preparations And the antioxidant activity of these preparations and the affinity to humic acids (HuA) were determined. There was a significant decrease in LifeLBL AH in the presence of humic acid. LifeLBL continued active after heating to 100 ° C and presented two bands by SDS-PAGE and gel filtration chromatography on Superdex 75-30 revealed two 19 and 15 kDa protein peaks. In 2D electrophoresis the estimated molecular weight was 20 and 15 kDa and the pI was 4.53 and 5.14. LifeLBL AH was partially inhibited by N-acetyl-D-glucosamine and entirely by serine bovine albumin. In relation to HuA, LifeLBL had its affinity for increased humic acid when alkalized the medium and reduced in the presence of metallic ions, probably due to structural modification of HuA. The phytochemical tests revealed that the lectin samples from L. caste var. Leiostachya Benth presented: condensed proanthocyanidins, water soluble tannins and flavonoids, and the sample purified by chitin affinity chromatography was free of components of secondary metabolism. In conclusion, a thermostable lectin (LifeLBL) was partially inhibited by N-acetyl-Dglucosamine and humic acid, and was obtained from L. ferrea binders by chitin affinity chromatography. LifeLPL was able to coagulate kaolin particles in suspension in water. The results obtained in this work reinforce the importance of characterizing proteins and assaying their biological properties.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/24987 |
| Date | 26 February 2015 |
| Creators | SILVA, Carlos Eduardo Sales da |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/7863845087003953, CORREIA, Maria Tereza dos Santos |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Ciencias Biologicas, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/embargoedAccess |
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