Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The Renin-Angiotensin System (RAS) has been associated with various reproductive
functions, including the ovulatory cascade. Unlike angiotensin II (AngII), the role of
angiotensin-(1-7) [Ang-(1-7)] has not been characterized in the ovary of mono-ovulatory
species. The objective of this study was to determine the Ang-(1-7) concentration in follicular
fluid and Ang-(1-7)-related enzymes and MAS receptor mRNA expression during the
ovulatory process in cattle. Forty cows were synchronized and those with follicular diameter
≥ 12 mm received GnRH analog (i.m.) to induce a LH peak and were ovariectomized at
different periods (0, 3, 6, 12 and 24 h). Follicular fluid was stored to measure Ang-(1-7).
Theca and granulosa cells were collected to evaluate gene expression by RT-qPCR assay. In a
second experiment, the effect of Ang-(1-7) and A-779 (MAS receptor inhibitor) on the
epiregulin mRNA expression by granulosa cells was evaluated in vitro. In the third
experiment, the hypothesis that Ang-(1-7) is essential for ovulation was tested using an in
vivo model by injecting A-779 intrafollicularly. Twenty synchronized cows were
intrafollicularly injected with A-779 or saline 0.9% (control group) when the follicles reached
a diameter of at least 12 mm and were challenged with an IM application of GnRH analogs.
The levels of Ang-(1-7) increased in the follicular fluid at 24 h post-treatment (p < 0.05).
Messenger RNA expression of MAS, ECA2, NEP and PEP was detected in theca and
granulosa cells at all periods after GnRH injection. In granulosa cells, ACE2, NEP and PEP
mRNA expression was regulated in different moments after GnRH treatment (p < 0.05). The
addition of Ang-(1-7) or A-779 was not able to change the pattern of Ereg mRNA expression
in our granulosa cell culture system. The intrafollicular application of A-779 (10-5M) did not
block ovulation when performed before the expected peak of LH (100% of cows ovulated in
treated and control groups). Differential expression of ACE2, NEP and PEP in granulosa cells
and increased concentrations Ang-(1-7) next ovulation may indicate a role of this peptide in
ovulation in cattle. / O Sistema Renina-Angiotensina (RAS) tem sido relacionado com diversas funções
reprodutivas, incluindo a cascata ovulatória. Ao contrário da Angiotensina II (AngII), a
função da Angiotensina-(1-7) [Ang-(1-7)] ainda não está caracterizada no ovário de espécies
mono-ovulares como a bovina. Este estudo teve por objetivo determinar se os diferentes tipos
celulares de folículos pré ovulatórios expressam o receptor MAS para Ang-(1-7) e a enzima
conversora de angiotensina 2 (ECA2). Além disso, foi investigado se esses genes são
induzidos por LH durante o processo ovulatório. Quarenta vacas foram sincronizadas e
aquelas que alcançaram diâmetro folicular ≥ 12 mm receberam uma aplicação IM de GnRH e
foram ovariectomizadas via colpotomia em diferentes momentos (0, 3, 6, 12 e 24 h) após o
GnRH. O líquido folicular foi recuperado para dosagem de Ang-(1-7). As células da teca e da
granulosa foram isoladas e submetidas à extração de RNA e transcrição reversa. A expressão
relativa dos genes foi realizada por PCR em tempo real. Em um segundo experimento,
utilizando um modelo in vitro de cultivo de células de folículos ≥ 12mm, buscou-se avaliar o
efeito da Ang-(1-7) ou do bloqueio de seu receptor (MAS) na expressão de RNAm para
epirregulina (Ereg). No terceiro experimento, utilizando o modelo de injeção intrafolicular in
vivo, foi testada a hipótese de que Ang-(1-7) é essencial para a ovulação em bovinos. Vinte
vacas foram sincronizadas e quando os folículos atingiram um diâmetro mínimo de 12 mm,
receberam os tratamentos com A-779 (inibidor do receptor MAS) ou solução salina 0,9%
(grupo controle) e foram no momento da injeção intrafolicular desafiados com uma aplicação
IM de análogo de GnRH. Foi detectada a presença de Ang-(1-7) no líquido folicular, sendo
que seus níveis foram constantes até 12 h após o GnRH e aumentando (P <0,05), às 24 h após
o tratamento. A expressão de RNAm para MAS, ECA2, NEP e PEP foi detectada em células
da teca e granulosa em todos os períodos após a aplicação de GnRH. A expressão de RNAm
para ECA2, NEP e PEP, foi regulada nas células da granulosa em diferentes momentos após
tratamento com GnRH (P <0,05). Folículos pré-ovulatórios possuem Ang-(1-7) no líquido
folicular, bem como expressam RNAm para MAS, ECA2, NEP e PEP nas células da teca e
granulosa durante o processo ovulatório. A suplementação com Ang-(1-7), ou o bloqueio de
seu receptor nas doses utilizadas não foi capaz de alterar o padrão de expressão de RNAm
para Ereg em nosso sistema de cultivo de pedaços de folículos ≥ 12 mm. A aplicação
intrafolicular de A-779 (10-5 M) não bloqueou a ovulação quando realizada antes do início do
pico esperado de LH (100% das vacas ovularam nos grupos A-779 e controle). A expressão
diferencial das enzimas formadoras da Ang-(1-7) (ECA2, NEP e PEP) nas células da
granulosa e o aumento nas concentrações Ang-(1-7) no líquido folicular próximos a ovulação
podem indicar um papel desse peptídeo na ovulação em bovinos.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsm.br:1/10098 |
| Date | 28 February 2011 |
| Creators | Santos, Joabel Tonellotto dos |
| Contributors | Gonçalves, Paulo Bayard Dias, Seneda, Marcelo Marcondes, Mesquita, Fernando Silveira |
| Publisher | Universidade Federal de Santa Maria, Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, UFSM, BR, Medicina Veterinária |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSM, instname:Universidade Federal de Santa Maria, instacron:UFSM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 500500000007, 400, 500, 500, 500, 500, fcd33ccc-f08d-428c-b7da-9d3757cf0a96, d1196f56-cc01-4eb3-bf3c-cc21d88a04d6, 30f4c358-5ad1-4a96-b86d-968224fd6ddd, adffc152-b51a-4994-bc74-2305d45886af |
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