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Previous issue date: 2016-03-14 / Defensinas são peptídeos antimicrobianos (AMPs) que apresentam atividade contra
diversos microrganismos patogênicos, em especial fungos. Embora não totalmente
elucidados, há diversos mecanismos de ação propostos para as defensinas, que
incluem permeabilização seletiva ou ruptura da membrana plasmática de
microorganismos, ação direta em alvos intracelulares, ativação de cascatas de
sinalização e aumento da produção de espécies reativas de oxigênio. Desde a sua
descoberta e, tendo em vista sua ampla atividade biológica, o uso de defensinas no
melhoramento de plantas cultivadas, bem como na produção de novos
medicamentos tem sido proposto. Estudos de atividade biológica e possível
aplicação biotecnológica das defensinas demandam uma grande quantidade dessas
proteínas. Entretanto, o processo de extração da mesma é laborioso, dispendioso e,
de acordo com a população ou disponibilidades da espécie vegetal escolhida, não
sustentável ecologicamente. Portanto, a utilização de sistemas heterólogos de
expressão é uma importante ferramenta para obtenção de defensinas
recombinantes em escala industrial. Nesse estudo, um gene de defensina “DeHys”,
isolado da Euphorbia hyssopifolia, foi inserido no plasmídeo pET102/D-TOPO e
células da linhagem BL21(DE3) de Escherichia coli foram transformada com essa
construção. Foi produzida a defensina recombinante Dehys com tamanho
aproximado de 24 kDa. Sua identidade foi confirmada por western blot e pela análise
do padrão de digestão com proteases. / Defensins are antimicrobial peptides (AMPs) , which present activity against a variety
of pathogenic microorganism, especially funghi. Although not completely elucidated,
there are a variety of proposed mechanisms of action for defensins, which includes
selective microorganisms plasmatic membrane permeabilization or rupture, straight
action agains intracellular targets, activation of signaling cascades and the burst of
reactive oxygen species. Since it’s discovery and due to it’s wide biological activities,
it’s use in crop enhancing, as well as its use in the development of new drugs have
been proposed. Defensin’s biological activity and biotecnological application studies
demand a reasonable amount of purified protein. However, the extraction processes
is laborious, expensive, time consuming and depending on the population or the
chosen plant species supply, not ecologically sustainable. So, the use of
heterologous expression sytems is an importante tool to obtain purified proteins in
industrial scale. In this study, a defensing gene (Dehys) isolated from Euphorbia
hyssopifolia was inserted in a p pET102/D-TOPO vector and trasnformed into
BL21(DE3) Escherichia coli strains. A recombinat Dehys defensin of approximately
24 kDa was obtained. It’s identity was double-checked using by Western blot and
protease digestion pattern analyses.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/19523 |
| Date | 14 March 2016 |
| Creators | GAZZANEO, Luiz Rodrigo Saldanha |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/3473903684822728, FREITAS, Antônio Carlos, PANDOLFI, Valesca |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Genetica, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Breton |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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