Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-07-12T15:47:35Z
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Dissertação Gustavo Barbosa de Lima PPGG UFPE 2016.pdf: 2227933 bytes, checksum: 03616701d6dbf5994db493d4eb7b243c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-12T15:47:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2
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Previous issue date: 2016-03-09 / A família de protozoários tripanosomatídeos apresenta características
moleculares diferenciadas dos demais eucariotos, onde a regulação da expressão
gênica é feita principalmente em nível pós-transcricional. Como em outros
eucariotos, acredita-se que a iniciação da tradução seja uma etapa crítica de
controle pós-transcricional, onde atuam diferentes fatores de iniciação da
tradução (eIFs). Nesta etapa os pontos centrais são o reconhecimento do mRNA
maduro e o recrutamento do ribossomo para dar início ao processo, atividades
realizadas pelo complexo eIF4F, formado por três subunidades: eIF4E, eIF4A e
eIF4G. Nos tripanosomatídeos foram descritos seis homólogos de eIF4E, a
proteína de ligação ao cap. Dois destes, EIF4E3 e EIF4E4, participam da
formação de complexos envolvidos no processo de tradução e outros dois,
EIF4E5 e EIF4E6, participam de novos complexos de função desconhecida.
Destes quatro homólogos, o EIF4E4 já foi caracterizado, de forma que o presente
trabalho visa contribuir para o entendimento da importância dos demais (EIF4E3,
EIF4E5 e EIF4E6) na viabilidade e taxa de crescimento celular de Leishmania sp.
Construções gênicas foram geradas de forma a permitir a deleção das duas
cópias gênicas de cada proteína por meio da transfecção de Leishmania e
seleção com antibióticos. As três proteínas, e mutantes do EIF4E3, foram ainda
expressas em parasitas transgênicos para a realização de experimentos de
complementação. Os resultados mostram que os baixos níveis de expressão de
EF4E5 e EIF4E6 indicam que as três proteínas parecem ser importantes para a
viabilidade celular com funções não sobrepostas. Sítios específicos no EIF4E3
foram também identificados de forma isolada como essenciais para a função da
proteína e críticos para a sobrevivência do organismo. Os resultados obtidos
neste trabalho mostram a importância do estudo do papel destes homólogos de
eIF4E na síntese protéica, assim com seu papel na biologia celular de
tripanossomatídeos. / The Trypanosomatid of protozoans display distinct molecular features not seen in
other eukaryotes, where the regulation of gene expression is mainly performed at
the post-transcriptional level. As in other eukaryotes, it is believed that the initiation
of translation is a critical stage of post-transcriptional control, where different
initiation factors (eIFs) are active. At this stage, critical steps are the recognition of
the mature mRNA and the ribosome recruitment to start the process, activities of
the eIF4F complex, consisting of three subunits: eIF4E, eIF4A and eIF4G. In
trypanosomatids, six homologues of eIF4E, the cap binding protein, have been
described. Two of these, EIF4E3 and EIF4E4, participate in the formation of
complexes involved in the translation process and two others, EIF4E5 and
EIF4E6, participate in new complexes of unknown function. Among these four
homologues, EIF4E4 has been better characterized, so that the present work aims
to contribute to the understanding of the remaining homologues (EIF4E3, EIF4E5
and EIF4E6) and study their importance for cell viability and growth rate of
Leishmania species. Gene constructs were generated to allow deletion of the two
gene copies of each protein by transfection of Leishmania cells and selection with
antibiotics. The three proteins and EIF4E3 mutants were also expressed in
transgenic parasites in order to carry out complementation experiments. The
results show low levels of expression of EF4E5 and EIF4E6 and indicate that the
three proteins appear to be important for cell viability with non-overlapping
functions. EIF4E3 specific residues were also identified which are essential for the
protein to the function and critical for the survival of the organism. The results of
this study highlight the importance of the study on the role of eIF4E homologues in
protein synthesis, as well as their role for the trypanosomatids cell biology.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/19537 |
| Date | 09 March 2016 |
| Creators | LIMA, Gustavo Barbosa de |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/6769466465877287, MELO NETO, Osvaldo Pompílio de |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Genetica, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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