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Previous issue date: 2015-12-01 / CAPEs / O uso de insetos visando responder aos quesitos levantados em investigações
criminais ganhou espaço nas últimas décadas entre os pesquisadores e
profissionais desta área, assim como a combinação de técnicas de genética
forense para a obtenção de DNA humano a partir destes organismos, em
especial dos dípteros necrófagos. Desse modo, neste estudo objetivou-se obter
e testar um protocolo de identificação de DNA humano extraído a partir de larvas
de dípteros coletadas em cadáveres no Instituto de Medicina Legal de
Pernambuco Antonio Persivo Cunha (IMLAPC/PE). Inicialmente, espécimes
imaturos foram coletados no IMLAPC/PE e criados em dieta a base de carne
moída bovina para possibilitar a identificação da espécie mais abundante e
frequente que se cria neste substrato. A espécie Chrysomya albiceps (Diptera:
Calliphoridae) foi selecionada como modelo experimental. Grupos de larvas
dessa espécie foram submetidos a uma dieta baseada em carne moída e sangue
humano por 48 horas, dissecadas e submetidas a extração de DNA, utilizandose
duas metodologias comumente adotadas pelos laboratórios de genética
forense: Kit DNA IQ™ e Método Fenol-Clorofórmio. O DNA extraído foi
quantificado através de Nanodrop® e Real-Time PCR 7500 com uso do
Quantifiler® Duo DNA Quantification. Para amplificação do DNA foram usados os
kits para STR (short tandem repeats): AmpFℓSTR® Identifiler® Plus PCR Kit,
Argus X-12® Kit e PowerPlex® Fusion System kit. As amostras amplificadas
foram analisadas por eletroforese capilar em ABI PRISM 3500, permitindo
observar que, para os kits utilizados houve perfis íntegros e compatíveis com a
amostra referência, a partir da extração com kit DNA IQ™ e/ou método Fenol-
Clorofórmio. Além disso, foram testados quatro meios de armazenagem
comumente utilizados em zoologia: etanol 70%, etanol 95%, formol 4% e via
seca. Após 24 horas de armazenagem, as amostras foram submetidas aos
processos de análise de DNA e o formol 4% apresentou os melhores perfis de
DNA. O fato de haver perfis passíveis de comparação confirma a utilidade das
larvas de dípteros usadas para este fim, as quais podem futuramente ser usadas
para correlacionar perfis genéticos com uma cena criminal. O aprimoramento
destas técnicas é necessário para que o uso das larvas de dípteros muscóides
com emprego para a entomogenética tenha mais difusão entre os meios
acadêmico e forense. / The use of insects for investigations has gained ground in recent decades among
researchers and criminal professionals. Recently, the use of these animals has
been combined with forensic genetics techniques for obtaining human DNA from
these. Among the main focus groups for this technique are the carrion flies that
have the host DNA extracted from intestinal contents. Because the visibility of
this branch of forensic biology, this study aimed to obtain and test a protocol for
identifying human DNA extracted from larvae of Diptera at the Instituto de
Medicina Legal de Pernambuco Antonio Persivo Cunha (IMLAPC/PE). The
species Chrysomya albiceps (Diptera: Calliphoridae) was selected as an
experimental model. Groups of larvae of this species were subjected to diet
ground meat and human blood for 48 hours, dissected and subjected to DNA
extraction using two methods commonly used by forensic genetics laboratories:
DNA IQ™ Kit and Method phenol-chloroform. The extracted DNA was quantified
by Nanodrop® and Real-Time PCR 7500 with use of Quantifiler® Duo DNA
Quantification. For DNA amplification kits for STR (short tandem repeats) were
used: AmpFℓSTR® Identifiler® Plus PCR Kit, Argus X-12® Kit and PowerPlex®
Fusion System kit. The amplified samples were analyzed by capillary
electrophoresis in ABI PRISM 3500, allowing to observe for kits used there have
upright profiles and compatible with the reference sample, from the IQ™ DNA
extraction kit and/or phenol-chloroform method. In addition, four storage means
commonly used in zoology were tested: 70% ethanol, 95% ethanol, 4%
formaldehyde and dry. After 24 hours of storage, the samples were submitted to
DNA analysis processes and the 4% formaldehyde DNA showed the best profile.
The fact that there be comparable profiles confirms the usefulness of dipteran
larvae used for this purpose, which can further be used to correlate genetic
profiles and a criminal scene. The improvement of these techniques is required
for the use of larvae dipterae with employment for the entomogenetics have more
diffusion among academic and forensic means.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/17461 |
| Date | 01 December 2015 |
| Creators | OLIVEIRA, Tatiana Costa de |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/0375372674397504, CROVELLA, Sergio |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Biologia Aplicada a Saude, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Breton |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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