O carcinoma epidermoide é a neoplasia maligna mais comum em boca e está entre as principais causas de morbidade e mortalidade em todo o mundo, devido a seu comportamento agressivo, evoluindo à metástase loco regional e a distância. O microambiente tumoral contém numerosos tipos celulares e muita atenção tem sido dada na literatura científica sobre a participação das células inflamatórias no desenvolvimento e progressão do câncer, pois as células neoplásicas são capazes de subverter a resposta imune. Os linfócitos T são o componente central na imunidade antitumoral, através da produção de citocinas por células e morte celular. Pouco se sabe sobre como substratos derivados de células neoplásicas influenciam as células no microambiente tumoral. Assim, o presente estudo propôs analisar a influência do meio condicionado derivado de células de carcinoma epidermoide de língua (SCC4 e MC SCC9) sobre linfoblastos (CEM) e células mononucleares do sangue periférico (PBMC-A e PBMC-B) para compreender melhor seu papel na imunidade anti-tumoral, imunoedição e evasão imune. Após estimulação com meio condicionado, os linfoblastos e as PBMCs foram submetidas ao ensaio de viabilidade celular, de citometria de fluxo e RT-qPCR para analisar a expressão de genes de apoptose e citocinas. O meio condicionado também foi coletado e avaliado por ELISA para verificar as citocinas secretadas pelas SCCs, bem como pela CEM e PBMC. Ambos meios condicionados foram capazes de reduzir a viabilidade da CEM e das PBMCs. A expressão de BCL2 e BAK não foi afetada na CEM, enquanto que MC SCC4 aumentou a expressão de BAK na PBMC-B. Os MCs das SCCs apresentaram expressão reduzida de IL-1?, IL-10 e INF-?. A IL-6 e IL-8 são expressas em níveis um pouco maiores pela SCC4 e superexpressas pela SCC9. A linhagem CEM não apresentou expressão de RNAm de IL-6, enquanto que a PBMC-B apresentou redução da expressão de IL-6 quando cultivada com ambos meios, sendo significativa com o meio MC SCC9. A expressão de RNAm de IL-8 reduziu na CEM e aumentou na PBMC-B com ambos os meios. A diferenciação para células CD4+ aumentou com ambos os MCs nas duas linhagens, reduzindo células CD34+. O MC SCC4 não alterou o número de linfócitos T CD4+/FOXP3+ da CEM e PBMC-B. O MC SCC9 induziu aumento da população CD4+/CD8+ na PBMC-B e amos os MCs induziram aumento da população CD8+/FOXP3+ da PBMC-B. Os resultados sugerem que os produtos derivados de carcinoma epidermoide de língua podem variar nas linhagens celulares, reduzindo a viabilidade, alterando a expressão de citocinas e aumentando as células CD4+ nas duas linhagens e aumentando o perfil CD8+/FOXP3+ e CD4+/CD8+ nas PBMCs. / Squamous cell carcinoma is the most common malignant neoplasm of the oral cavity, featuring as one of the main causes of morbidity and mortality due to its aggressive behavior, locoregional and distant metastases. Attention has been given to the tumor microenvironment and the role of the inflammatory cells may develop in the progression of cancer, because neoplastic cells are capable of subverting the immune response. T cells play is a central actor in the antitumor immunity because of their cytokine production by living and dying cells. Little is known about how the products derived from neoplastic cells interact with the cells in the tumor microenvironment. Therefore, the present study aimed to analyze the influence of a conditioned medium (CM) derived from tongue squamous carcinoma cells (SCC4 and SCC9) on lymphoblasts (CEM) and peripheral blood mononuclear cells (PBMC-A e PBMC-B), in order to better understand its role in the antitumor immunity, immunoediting and immune evasion. Lymphoblast and PBMCs were stimulated by the conditioned medium and then submitted to a cell viability assay, flow cytometry and RT-qPCR in order to analyze the expression of apoptotic and cytokine-related genes. To verify which cytokines were secreted by SCCs as well as by CEM and PBMCs, the conditioned medium was also collected and evaluated by ELISA. Both types of conditioned medium reduced CEM and PBMC viability. For CEM, BCL2 and BAK expression remained unaffected, wherea s for PBMC-B there was an increase in the expression of BAK using the CM-SCC4. CMs showed reduced expression of IL-1?, IL-10 and INF-?. IL-6 and IL-8 are expressed a bit higher levels by SCC4 and high expressed by SCC9.CEM showed no IL-6 mRNA expression. PBMC-B reduced the expression of IL-6 when cultivated with both types of CM, with a significant reduction with the CM- SCC9. For both types of medium, IL-8 mRNA was reduced in CEM and increased in PBMC-B. The differentiation towards CD4+ cells was increased with both MCs in the two cell lines. CM-SCC4 did not altered the number of CD4+/FOXP3 cells of CEM and PBMC-B. CM-SCC9 increased the population of CD4+/CD8+ cells of PBMC-B and both types of CM increased the population of CD8+/FOXP3+ of PBMC-B. Collectively, our results suggest that the products derived from tongue squamous cell carcinoma may vary between the cell lines and reduce the viability, change cytokine expression and increase CD4+ cells and also increase the population of CD8+/FOXP3+ and CD4+/CD8+ in PBMCs.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-13032019-151348 |
| Date | 22 October 2018 |
| Creators | Castro, Sofia Beviláqua de |
| Contributors | Nunes, Fabio Daumas |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | Dissertação de Mestrado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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