ISOLERING OCH KVANTIFIERING AV GENOMISKT DNA FRÅN MAKROFAGER STIMULERADE MED ALUMINIUMADJUVANT GECHSIEM CHUY Chuy, G. Isolering och kvantifiering av genomiskt DNA från makrofager stimulerade med aluminiumadjuvant. Examensarbete i biomedicinsk laboratorievetenskap, 15 högskolepoäng. Malmö universitet: Fakulteten för hälsa och samhälle, Institutionen för biomedicinsk laboratorievetenskap, 2022. Makrofager har flera funktioner i immunförsvaret och förekommer i olika fenotyper beroende på stimulering. M1 makrofager är pro-inflammatoriska och stimuleras av lipopolysackarider och interferon-gamma. M2 makrofager är anti-inflammatoriska som stimuleras av interleukin-4 (IL-4) och IL-13 medan M0 makrofager är icke polariserade. Dessa olika former av makrofager utför olika funktioner och behöver därför uttrycka olika delar av genomet. Reglering av genuttrycket sker bland annat genom metylering av cellernas DNA. Aluminiumadjuvant har under lång tid använts som tillsatser i vaccin och fungerat som förstärkare för immunförsvaret mot antigenet som ingår i vaccinet. För att kunna undersöka om aluminiumadjuvant också påverkar makrofagers metyleringsgrad måste genomiskt DNA kunna isoleras från cellerna både med och utan stimulering av aluminiumadjuvant. Syftet med studien var att undersöka om differentiering och polarisering av makrofager i cellodlingsplattor med bottenytor av 3,8 respektive 9,5 cm2 i brunnarna ger nog med celler för att reproducerbart kunna isolera och kvantifiera genomiskt DNA med en koncentration av minst 1 ng/μl från makrofager stimulerade med aluminiumadjuvant. Resultatet från denna studie visar att differentiering och polarisering av makrofager i cellodlingsplatta med bottenyta 9,5 cm2/brunn ger tillräckligt med celler för att kunna extrahera genomiskt DNA med koncentrationer högre än 1 ng/μl. Betydligt högre mängder DNA erhölls när cellerna eluerades från cellodlingsplattan innan cellerna lyserades inför isolering DNA. Det är därför av största vikt att adherenta celler elueras och att lysering av celler inför isolering av genomiskt DNA görs på celler i suspension. Vidare visade resultaten att för makrofagerna som stimulerade med aluminiumadjuvant gav lägre DNA utbyte jämför med cellerna utan stimulering. Studien har visat ett förfarande för optimering av preparationssteg inför DNA extraktion som gör det möjligt att isolera DNA på ett reproducerbart sätt inför fortsatta studier. Nyckelord: Aluminiumadjuvant, DNA, immunförsvaret, makrofager, polarisering.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UPSALLA1/oai:DiVA.org:mau-52701 |
| Date | January 2022 |
| Creators | Chuy, Gechsiem |
| Publisher | Malmö universitet, Institutionen för biomedicinsk vetenskap (BMV) |
| Source Sets | DiVA Archive at Upsalla University |
| Language | Swedish |
| Detected Language | Swedish |
| Type | Student thesis, info:eu-repo/semantics/bachelorThesis, text |
| Format | application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0019 seconds