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Previous issue date: 2015-08-28 / Staphylococcus aureus is an important foodborne pathogen, able to produce
extracellular toxins and to express antimicrobial resistance. Among the foods involved
in staphylococcal food poisoning, stands out the cheese, especially when
manufactured under improper hygienic and sanitary conditions. The objectives of this
study were to characterize Staphylococcus aureus isolated from artisanal and
industrialized Minas frescal cheeses, to determine their antimicrobial susceptibility
profile as well as the genetic similarity among the isolates. The isolates were also
tested for staphylococcal enterotoxins (SE) genes and other virulence factors. Fifty-six
artisanal raw milk cheeses sold at street fairs and 10 industrialized cheeses
commercialized in supermarkets of Goiânia, Goiás were analyzed between June and
August 2014. S. aureus was confirmed in 19 samples (33.9%) of artisanal cheese by
detection of femA gene, in which 29 isolates were obtained. These isolates were
submitted to the antimicrobial susceptibility test and classified into nine different
profiles (A - I). Thirteen isolates (44.8%) were resistant to penicillin and three (10.3%)
to tetracycline, with two (7.4%) resistant to both. The Multiplex PCR technique was
performed to detect virulence genes that code for the production of hemolysins (Hla
and Hlb), toxic shock syndrome toxin (TSST-1), exfoliative toxins (ETa and ETb) and
enterotoxins (SEA - SEE, SEG - SEJ, SEM - SEO). Genes encoding TSST-1 and
exfoliative toxins were not detected. All the isolates amplified for the hla gene and 14
(48.3%) for the hbl gene. The seh gene was the most frequently detected (n=11,
37.9%) followed by seo gene (n = 3; 10.3%), seg, sem and sen genes (n = 2, 6.9%)
and sec and sei genes (n = 1, 3.4%). In one isolate (3.4%), four enterotoxins genes
were detected, and in another, six (3.4%). The comparison performed by Pulsed Field
Gel Electrophoresis technique revealed 18 different DNA banding patterns which were
grouped into five clusters. The genotyping found high genetic similarity among the
isolates. Identical isolates were obtained from different samples and one sample
showed more than one genetically different isolate. It was identified up to four different
isolates from the same sample. The high prevalence of S. aureus in a widely consumed
product like Minas fresh cheese, as well as the detection of toxin encoding genes
identified in this study, warns of the necessity to reduce the contamination levels in this
type of cheese through monitoring and controling the production and trade of the
product. / S. aureus é um importante patógeno de origem alimentar com capacidade de
produção de toxinas extracelulares e resistência antimicrobiana. Entre os alimentos
envolvidos em intoxicação alimentar estafilocócica, destaca-se o queijo,
principalmente quando fabricado em condições higienicossanitárias impróprias. Os
objetivos deste estudo foram caracterizar S. aureus isolados de queijo Minas frescal
artesanal e industrializado, determinar o perfil de suscetibilidade a antimicrobianos,
bem como determinar a similaridade genética entre os isolados. Os isolados foram
também testados para genes de enterotoxinas estafilocócicas (SE) e outros fatores
de virulência. Foram analisadas 56 amostras de queijo Minas frescal de fabricação
artesanal e dez de fabricação industrial comercializados em feiras livres e
supermercados de Goiânia-GO, coletadas entre junho e agosto de 2014. S. aureus foi
confirmado em 19 amostras (33,9) de queijo artesanal através da detecção do gene
femA, onde 29 isolados foram obtidos. Estes isolados foram submetidos ao teste de
susceptibilidade aos antimicrobianos e classificados em nove diferentes perfis (A - I).
Treze isolados (44,8%) foram resistentes à penicilina e três (10,3%) à tetracilina,
sendo dois (7,4%) resistentes a ambos. A técnica de multiplex PCR foi realizada para
a detecção de genes de virulência que codificam a produção de hemolisinas (Hla e
Hlb), TSST-1, toxinas esfoliativas (ETa e ETb) e enterotoxinas (EEA - EEE, EEG -
EEJ, EEM - EEO). Genes que codificam as toxinas TSST-1 e esfoliativa não foram
detectados. Todos os isolados amplificaram para o gene hla e 14 (48,3%) para o gene
hlb. O gene seh foi o mais frequentemente detectado (n=11; 37,9%), seguido do gene
seo (n=3; 10,3%), genes seg, sem, sen (n=2; 6,9%) e os genes sec e sei (n=1; 3,4%).
Um isolado (3,4%) amplificou genes para quatro enterotoxinas e outro (3,4%) para
seis. A comparação dos 29 isolados de S. aureus feita por PFGE revelou 18 padrões
de bandas diferentes de DNA agrupados em cinco clusters. A genotipagem
demonstrou alta similaridade genética entre os isolados. Isolados idênticos foram
obtidos de amostras diferentes e uma mesma amostra apresentou mais de um isolado
geneticamente diferente. Identificou-se até quatro diferentes isolados da mesma
amostra. A alta prevalência de S. aureus nas amostras de queijo Minas Frescal, bem
como a detecção de genes para produção de toxinas, alertam para a necessidade de
reduzir os níveis de contaminação neste tipo de queijo através de monitoramento e
controle da produção e comércio do produto.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/5564 |
| Date | 28 August 2015 |
| Creators | Ferreira, Mariana de Andrade |
| Contributors | André, Maria Cláudia Dantas Porfirio Borges, Campos, Maria Raquel Hidalgo, Borges, Liana Jayme, André, Maria Cláudia Dantas Porfírio Borges |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Nutrição e Saúde (FANUT), UFG, Brasil, Faculdade de Nutrição - FANUT (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | -3010970718164250106, 600, 600, 600, 9028001981735587154, -1073001350029933100 |
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