Orientador: Prof. Dr. Luciano Puzer / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2017. / Myxobacterias sao bacterias Gram-negativas com uma peculiaridade no ciclo de vida em comparacao a outros procariotos. Em resposta a periodos de baixa disponibilidade de nutrientes, inicia-se um processo de morfogenese cooperativa que culmina na formacao de corpos de frutificacao, um agregado de celulas que contem estruturas de resistencia caracteristicas. Subtilisinas sao serino proteases da familia S8A, inicialmente encontrada no Bacillus subtilis e atualmente identificada em uma ampla variedade de organismos procarioticos e eucarioticos. Essas enzimas apresentam um grande mercado de aplicacoes biotecnologicas e industriais. O objetivo deste trabalho foi clonar aqualisina, uma subtilisina extracelular da Myxococcus xanthus, uma especie de myxobacterias que preda outros microrganismos, e submete-la a um sistema de expressao heterologa em celulas E. coli BL2 (DE3). A proteina permaneceu na fase insoluvel apos as lises; portanto, foi necessario otimizar protocolos de solubilizacao e purificacao da aqualisina dos corpos de inclusao da celula, para que fosse possivel a caracterizacao cinetica. A solubilizacao utilizando tampao 0,1M de tris e pH 12 mostrou-se a mais eficiente em solubilizar os corpos de inclusao, o que permitiu obter os valores cineticos Km de 0,6 e 1,3 ¿ÊM, para aqualisina purificada (AQN) e para nao retida pela coluna (FT), respectivamente, que demonstram uma alta afinidade pelo substrato utilizado. No entanto, valores obtidos de kcat, e kcat/Km apontam a presenca de duas populacoes de proteinas, nas quais a populacao inativa esta presente em maior quantidade. Embora o sistema de expressao da aqualisina tenha ocorrido com sucesso, a solubilizacao dos corpos de inclusao sem utilizacao de agentes desnaturantes, e posterior purificacao ainda necessitam ser otimizadas, a fim de aumentar a recuperacao de enzima ativa, possibilitando que sua caracterizacao cinetica seja realizada sem a influencia desta populacao de enzima inativa. / Despite its status as one of the oldest registered diseases, rabies remains a public health challenge. This zoonosis affects the central nervous system (CNS) of all mammals and is usually considered fatal. However, some cases in which the disease was reportedly cured have been registered worldwide, leading to renewed interest in researching potential antiviral mechanisms against the rabies virus (RABV). The aim of this work was to evaluate the antiviral activity of the hydroethanolic plant extract Dalbergia variabilis against different genetic lineages of RABV. In the first step, the maximum tolerated concentration (MTC) of plant extract in murine neuroblastoma cells (N2a) was determined to be 1.56 mg/ml. The antiviral activity of plant extract Dalbergia variabilis was evaluated to determine the difference presence and absence of the plant extract in four samples of RABV (IP4005- sample of RABV with the genetic lineage characteristic of haematophagous bat, Desmodus rotundus; IP964- sample of RABV with the genetic lineage characteristic of insectivorous bat, Eptesicus furinalis; IP4871- sample of RABV with the genetic lineage characteristic of wild dog, Cerdocyon thous; and a standard sample of RABV, "Pasteur vírus" - PV). Since there was a difference in the infectious viral titer between the RABV samples analysed in the presence of the plant extract, subsequent experiments were carried out to better understand the performance of this plant extract against RABV. The antiviral activity of plant extract Dalbergia variabilis against samples of RABV was analysed, and the interference in viral replication was more significant against samples of RABV with genetic lineage characteristic of bats.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:BDTD:105647 |
| Date | January 2017 |
| Creators | Sant'Ana, Aquiles Melchior |
| Contributors | Puzer, Luciano, Silva, Wanius José Garcia da, Oliveira, Vitor Marcelo Silveira Bueno Brandão de |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf, 48 f. : il. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFABC, instname:Universidade Federal do ABC, instacron:UFABC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=105647&midiaext=74044, http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=105647&midiaext=74043, Cover: http://biblioteca.ufabc.edu.brphp/capa.php?obra=105647 |
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