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Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A dengue é a mais importante doença viral transmitida por mosquitos, no que diz respeito à morbidade e mortalidade, que afeta os seres humanos. Este vírus é transmitido pelos vetores
Aedes albopictus e Aedes aegypti, este último é o principal vetor nas Américas. O controle da
doença se baseia na vigilância laboratorial e vigilância entomológica. A vigilância laboratorial
visa aprimorar a capacidade do diagnóstico, detectando precocemente a circulação viral e
monitorando os sorotipos circulantes. Dentro deste tipo de vigilância, a RT-PCR é um método
bastante usado no diagnóstico da doença em humanos e mosquitos, porém, a má conservação
do material pode comprometer a integridade do RNA e trazer resultados falso-negativos. O
desenvolvimento de melhores métodos de vigilância do vírus dengue (DENV) em mosquitos é
de grande valor para os programas de controle. Desta maneira, o presente projeto visou
otimizar a técnica de RT-PCR Multiplex para detecção de DENV em amostras de Ae. aegypti
infectadas artificialmente pelo vírus. Primers que amplificam uma região de 80 pb do gene
rpL8 de mosquito foram desenhados no site Primer3 e avaliados na ferramenta online
Multiple Primer Analyzer, junto com primers que amplificam os sorotipos DENV. Não houve
competição de primers e foi observado bandas distintas no gel de agarose. Foi avaliado o
efeito de diferentes formas de preservação do material genético das amostras (RNAlater®,
freezer -80°C e nitrogênio líquido) por 7 dias, onde não houve diferenças significativas em
relação à integridade do RNA. O efeito de diferentes formas de extração de RNA (Kit da
QIAGEN®
, TRIzol®
e Chomczymski-Sacchi) também foi avaliado e o método ChomczymskiSacchi
obteve o melhor desempenho. A otimização desta técnica permitirá uma maior
confiabilidade nos resultados, já que além da detecção dos sorotipos, haverá uma confirmação
da qualidade do RNA, aprimorando a capacidade do diagnóstico e auxiliando a prevenção e
controle da transmissão da dengue.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/14345 |
| Date | January 2016 |
| Creators | Barbosa, Priscilla Paschoal |
| Contributors | Guedes, Duschinka Ribeiro Duarte, Ayres, Constância Flávia Junqueira, Dhalia, Rafael, Cordeiro, Marli Tenório, Ayres, Constância Flávia Junqueira |
| Publisher | Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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