CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A adenosina desaminase (ADA â E.C.3.5.4.4.) à uma enzima fundamental no catabolismo das purinas. Ela catalisa a desaminaÃÃo da adenosina ou 2âdeoxi-adenosina produzindo amÃnia e inosina ou 2â-deoxi-inosina, respectivamente. Sua atividade à expressa por 2 isoenzimas presentes em 3 isoformas. A ADA1 (36kDa) ou ADA1 ligada ao CD26 (280kDa) sÃo amplamente distribuÃdas nos tecidos. Sua aÃÃo à particularmente importante porque altos nÃveis de 2âdeoxi-adenosina sÃo tÃxicos para as cÃlulas do sistema imunolÃgico. A ADA2 (100kDa) à normalmente encontrada no soro e sintetizada somente pelo sistema monocÃtico-macrofÃgico. A importÃncia biolÃgica da ADA2 ainda nÃo està totalmente estabelecida, principalmente devido as suas caracterÃsticas cinÃticas. O presente trabalho teve como objetivo discriminar as isoenzimas da adenosina desaminase humana atravÃs de eletroforese em gel de agarose e pelo modelo proposto por Vale e Almeida (1998), bem como realizar um estudo descritivo retrospectivo sobre o perfil dos exames de ADA no Estado do CearÃ. As amostras de lÃquido ascÃtico, pleural e pericÃrdico foram submetidas à eletroforese em agarose a 1% a 80 V por 7 horas. O gel foi fatiado e cada fatia foi incubada em adenosina (22 ou 0,55mM) por 20 horas para a detecÃÃo da amÃnia liberada pela reaÃÃo enzimÃtica. Os resultados encontrados a partir da eletroforese foram comparados com os resultados achados pelo modelo de Vale e Almeida (1998). O lÃquido pleural à o fluido que à mais frequentemente solicitado para a determinaÃÃo da ADA, seguido pelos lÃquidos ascÃtico, cefalorraquidiano, pericÃrdico e soro. Observamos que os valores de atividade enzimÃtica sÃo influenciados pelo tipo de lÃquido corporal onde a enzima se encontra, podendo estar relacionada Ãs barreiras corporais, tais como a barreira hematoencefÃlica. A partir dos resultados obtidos, podemos concluir que o modelo matemÃtico proposto pode ser usado em laboratÃrios clÃnicos para discriminar as isoenzimas da ADA. / Adenosine deaminase (ADA â E.C.3.5.4.4.) is a fundamental enzyme in the catabolism of the purines. It catalyzes the deamination of adenosine or 2âdeoxy-adenosine producing ammonium and inosine or 2â-deoxyinosine, respectively. Its activity is expressed by two isoenzymes presented in three isoforms. ADA1 (36 kDa) and ADA1 bound to CD26 (280kDa) are widely distributed in the body tissues. Their action is particularly important because high levels of 2âdeoxy-adenosine are toxic for the immune system cells. ADA2 (100kDa) is normally found in serum and is synthesized only in monocyte-macrophage system. The biological importance of ADA2 is not yet fully clear, especially for its kinetics characteristics. The objective of the present work was to discriminate the isoenzymes of human adenosine deaminase using agarose electrophoresis and by mathematical model proposed by Vale and Almeida (1998). In addition, we performed a study of the profile of ADA tests in State of Ceara (Brazil). Samples of of ascites, pleural and pericardial effusion were submitted to electrophoresis in 1% agarose at 80V for 7 hours. The gel was sliced and each slice was incubated in adenosine (22 or 0,55mM) for 20 hours to detect the ammonium released by enzymatic reaction. The results found from electrophoresis were compatible with the model proposed by Vale and Almeida (1998). The pleural fluid is the most frequently requested for the determination of ADA, followed by ascitic fluid, cerebrospinal fluid, pericardial fluid and serum. We observed that the value of enzymatic activity is influenced by corporal fluid type where the enzyme is localized. These data can be associated with the corporal barrier, like brain barrier. We concluded that the proposed mathematical model could be used in clinical laboratories to discriminate ADA isoenzymes to improve the diagnostic method.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:3481 |
| Date | 15 January 2010 |
| Creators | Ãtalo Josà Mesquita Cavalcante |
| Contributors | Marcus Raimundo Vale, Renata de Sousa Alves, Alexandre Havt Bindà |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Farmacologia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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