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Previous issue date: 2018-06-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective of this study was to evaluate the influence of the use of single-layer colloidal silica of glycidoxypropyltrimethoxysilane-equine formulation-Androcoll-E® (Minitube, Germany) on the freezing of canine semen. For this, 5 dogs, of different breeds, with satisfactory semen characteristics (CBRA, 2013) were used. Seven ejaculates / animal were collected and subdivided, forming: Group A - samples centrifuged at 300g for 10 minutes using Androcoll-E® and group E samples centrifuged at 700g for 10 minutes using CaniPlus Enhance® medium (Minitube; Germany). In both groups, the steps of discarding the supernatant, resuspension of the pellet in CaniPlus Enhance® (1mL of medium / 100 x 106 spermatozoa), packaging (25 x 106 spermatozoa / pallet), refrigeration (2 to 6ºC for 2 hours) , freezing (20 minutes at 5cm over N2 vapor and storage at -196C in N2 canister) and thawing (at 37 ° C for 60 seconds). After 7 days, the samples were resubmitted to centrifugation, forming 4 subgroups (16 straws / animal / subgroup): AA (Androcoll-E® centrifugation in the pre- and post-thawing stage), AE (Androcoll-E® centrifugation at pre-freezing stage and CaniPlus Enhance® in post-thawing), EA (CaniPlus Enhance® centrifugation in pre-freezing and with Androcoll-E® after thawing) and EE (CaniPlus Enhance® centrifugation in pre and post-thaw stages). Microscopic analysis of semen (concentration, vigor, membrane integrity, sperm morphology, subjective and computerized motility) was performed. Test of variance, Tukey and Kruskall Wallis were used, considering p <0.05. There was a statistical difference in relation to computerized motility and sperm morphology. The mean trajectory velocity and curvilinear velocity were higher in the EE group, the cross flagellar beating and the rectilinearity in the EA group and the linearity in the AA group. In relation to sperm morphology, the EA group presented the highest percentage of morphologically intact cells (95%), whereas in the AE group, minor defects (23%) and higher were greater than acceptable (12%). The use of equine colloidal silica after thawing (EA group) selects morphologically intact spermatozoa, which present parameters that indicate a better migration capacity and penetration into the cervical mucus. / O objetivo deste estudo foi avaliar a influência do uso da centrifugação em camada única de sílica coloidal de glicidoxipropiltrimetoxissilano- formulação equina-Androcoll-E® (Minitube, Germany), na congelação do sêmen canino. Para isso, 5 cães, de raças distintas, com características seminais satisfatórias (CBRA, 2013) foram utilizados. Sete ejaculados/animal foram coletados e subdivididos, formando: Grupo A- amostras centrifugadas a 300g, por 10 minutos, utilizando Androcoll-E® e grupo E- amostras centrifugadas a 700g, por 10 minutos, utilizando o meio CaniPlus Enhance® (Minitube; Germany). Em ambos os grupos foram realizadas as etapas de descarte do sobrenadante, ressuspensão do pellet em CaniPlus Enhance® (1mL de meio/100 x 106espermatozoides), envase (25 x 106 espermatozoides móveis/palheta), refrigeração (2 a 6ºC por 2 horas), congelação (20 minutos a 5cm sobre vapor de N2 e armazenamento a -196ºC em botijão de N2) e descongelação (a 37ºC por 60 segundos). Após 7 dias, as amostras foram ressubmetidas à centrifugação, formando 4 subgrupos (16 palhetas/animal/subgrupo): AA (centrifugação com Androcoll-E® na etapa de pré e pós descongelação), AE (centrifugação com Androcoll-E® na etapa pré congelação e com CaniPlus Enhance® na pós descongelação), EA (centrifugação com CaniPlus Enhance® na pré congelação e com Androcoll-E® na pós descongelação) e EE (centrifugação com CaniPlus Enhance® nas etapas pré e pós descongelação). A análise microscópica do sêmen (concentração, vigor, integridade de membrana, morfologia espermática, motilidade subjetiva e computadorizada) foi realizada. Teste de variância, Tukey e Kruskall Wallis foram usados, considerando p<0,05. Houve diferença estatística em relação à motilidade computadorizada e morfologia espermática. A velocidade média da trajetória e curvilínea foram superiores no grupo EE, o batimento flagelar cruzado e a retilinearidade no grupo EA e a linearidade no grupo AA. Em relação à morfologia espermática, o grupo EA foi o que apresentou maior porcentagem de células morfologicamente íntegras (95%) enquanto no grupo AE, os defeitos menores (23%) e maiores foram superiores aos aceitáveis (12%). O uso da centrifugação com sílica coloidal equina pós descongelação (grupo EA) seleciona espermatozoides morfologicamente íntegros, que apresentam parâmetros que indicam melhor capacidade de migração e penetração no muco cervical.
Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede2.unifenas.br:jspui/207 |
Date | 20 June 2018 |
Creators | ROSA, Amarildo A. M. |
Contributors | DERUSSI, Ana A. A. P., NEVES, Jairo J. P., PALHAO, Miller M. P., AMARAL, Pedro P. I. S., INCERPI, Erika ERIKA K. |
Publisher | Universidade José do Rosário Vellano, Programa de Doutorado em Reprodução, Sanidade e Bem-estar Animal, UNIFENAS, Brasil, Pós-Graduação |
Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
Language | Portuguese |
Detected Language | Portuguese |
Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
Format | application/pdf |
Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UNIFENAS, instname:Universidade José do Rosário Vellano, instacron:UNIFENAS |
Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Relation | -6766796644297044908, 500, 500, 600, 600, -7642911903105032531, 453670264235017319, 2075167498588264571, AGARWAL, A.; SAID, T. Role of sperm chromatin abnormalities and DNA damage in male infertility. Human Reproduction Update, UK, v.9, n.4, p.331-345, july 2003. ALBERTS, B. et al. Biologia molecular da célula. 3.ed. Porto Alegre: Artes Médicas,1997. ALBERTS,B. et al. Biologia molecular da célula. 5.ed. New York: Garland Science, 2008. 1268 p. AMANN, R. P.; PICKETT, B. W. Principles of cryopreservation and review of cryopreservation of stallion spermatozoa. Journal of Equine Veterinary Science, Wildomar, Califórnia, v.7, n.3, p. 145-173, 1987. BARTH, A.D.; OKO, R.J. Abnormal morphology of bovine spermatozoa. Ames: Iowa State University Press, 1989. 285 p. BATEMAN, H.L. Effects of semen extender composition and cooling methods on canine sperm function and cryo-survival. 2001. 50f. Tese (Mestrado) - University of Guelph, 2001. BEDFORD,J.M.; HOSKINS,D.D. 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