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Previous issue date: 2008-08-18 / The objective of this work is to seek a protocol for regeneration of the melon
(Cucumis melo L.) cv. Gaucho and subsequent genetic transformation of this fruit. To
this end were conducted three experiments. In the first, the cotyledons were divided
into 2, 3, 4 and 5 equal parts, and inoculated with MS medium containing 30 g L
sucrose, 0.9 mg L-1 BAP, 0.3 mg L-1 ABA and 2.2 g L-1 CaCl2. It was observed that
the number of cuts not influenced the percentage of explants regenerated. In the
second experiment, using the same means of cultivation of the previous experiment,
the cotyledons were submitted to different densities of flow of photons. It was found
that the regenerative process was not affected by the absence or presence of light (2
and 21 μmol m-2 s-1), but when the explants remained in the dark had greater
formation of callus. In the third experiment sought to establish conditions for seed
germination and its effect on the regeneration under different concentrations of BAP.
It was the highest rate of explants regenerated lower when the period of germination
in the middle and lower the concentration of BAP in the regenerative. After obtaining
the protocol for regeneration, was conducted test of sensitivity of explants the
selection of antibiotic, setting up the concentration of 75 mg L-1, kanamycin as ideal
to select the cells transformed. For the regeneration of the shoots explants were
cultivated in MS medium containing 0.9 mg L-1 BAB, 0.3 mg L-1 ABA, 2.2 g L-1 CaCl2,
75 mg L-1 kanamycin and 250 mg L-1 cefotaxime. For the genetic transformation was
used Agrobacterium tumefaciens LBA 4404, with a clone of ACC oxidase in
antisense orientation, called pAP4as. However, it was not confirmed by inserting the
sequence, the PCR test, the tissue analyzed. It was found that these studies were
not described with Agrobacterium efficient to obtain seedlings containing the antisense gene of ACC oxidase. It was found that these studies were not described
with Agrobacterium efficient to obtain seedlings containing the antisense gene of
ACC oxidase. / O presente trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo eficiente de
regeneração para o melão (Cucumis melo L.), cv. Gaúcho, visando posterior
transformação genética do mesmo. Para tal fim foram realizados três experimentos.
No primeiro, os cotilédones foram divididos em 2, 3, 4 e 5 partes iguais e, inoculados
em meio MS contendo 30 g L-1 de sacarose, 0,9 mg L-1 BAP, 0,3 mg L-1 ABA e 2,2 g
L-1 CaCl2. No segundo experimento, utilizando o mesmo meio de cultura do
experimento anterior, os cotilédones foram submetidos a diferentes densidades de
fluxo de fótons. No terceiro procurou-se estabelecer as condições para germinação
das sementes e sua influência na regeneração cotiledonar sob diferentes
concentrações de BAP. Observou-se que cotilédones seccionados em 5 partes
apresentaram maior média de explantes regenerantes. Já os cotilédones que
permaneceram sob intensidade luminosa de 2 μmol m-2 s-1 apresentaram maior
média de explantes regenerantes e os que ficaram no escuro apresentaram maior
média de explantes com calos e raiz. Observou-se também que quanto maior o
período germinativo e maiores concentrações de BAP no meio regenerativo, menor
é a taxa de explantes regenerantes. Após a obtenção do protocolo de regeneração,
foi realizado teste de sensibilidade dos explantes ao antibiótico de seleção,
determinando-se a concentração de 75 mg L-1 de canamicina como ideal para
selecionar as células transformadas. Para a regeneração de brotações os explantes
foram cultivados em meio MS contendo 0,9 mg L-1 BAP, 0,3 mg L-1 ABA, 2,2 g L-1
CaCl2, 75 mg L-1 canamicina e 250 mg L-1 cefotaxima. Para a transformação
genética, foi utilizado Agrobacterium tumefaciens LBA 4404, com um clone da ACC
oxidase em orientação antisense, denominado pAP4as. Entretanto, não foi
confirmada a inserção da seqüência, pelo teste de PCR, nos tecidos analisados. Verificou-se que estes estudos descritos com Agrobacterium não foram eficientes
para a obtenção de plântulas contendo o gene antisense da ACC oxidase.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpel.edu.br:123456789/1259 |
| Date | 18 August 2008 |
| Creators | Benemann, Daiane de Pinho |
| Contributors | CPF:12375918953, http://lattes.cnpq.br/0540625238777673, Braga, Eugenia Jacira Bolacel, Peters, José Antonio |
| Publisher | Universidade Federal de Pelotas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFPel, BR, Biotecnologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPEL, instname:Universidade Federal de Pelotas, instacron:UFPEL |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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