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cristiane_f_silva_ioc_bp_0051_2011.pdf: 4625689 bytes, checksum: 9b9576a91ed1d5f8dcd03755634e513e (MD5) / Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo,
Conselho Nacional Desenvolvimento Científico e Tecnológico,PAPES V/FIOCRUZ,Consortium for Parasitic Drug
Development / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Departamento de Ultra-Estrutura e Biologia Celular. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O atual tratamento da doença de Chagas (DC) se baseia em dois compostos
nitroderivados, o Nifurtimox (Nf) e benznidazol (Bz), ambos introduzidos na clínica
médica há cerca de 40 anos e que têm sido considerados insatisfatórios
principalmente devido à baixa atividade, sobretudo na fase crônica, além de alta
toxicidade e/ou ocorrência de isolados do parasito resistentes a ambos
nitroderivados. Assim como um dos principais desafios ainda a serem enfrentados
há mais de cem anos depois da descoberta da DC diz respeito a identificação de
novas terapias alternativas para o tratamento desta negligenciada parasitose, esta
temática representou o principal objetivo da presente tese. Assim, estudos in vitro e
in vivo foram conduzidos visando avaliar a eficácia de amidinas aromáticas, incluindo
diamidinas e arilimidamidas (AIAs) sobre o T.cruzi, analisando ainda a localização e
distribuição dos compostos aromáticos assim como seus alvos celulares. Nossos
dados revelaram a ação tripanocida de diamidinas e AIAs sobre formas sanguíneas
e amastigotas do parasito, em faixa micro e nanomolar, respectivamente. Alguns dos
compostos estudados, em especial as AIAs DB745 e DB1831 exibiram excelente
efeito sobre formas sanguíneas na presença de sangue a 4oC, demonstrando seu
potencial uso também na profilaxia de bancos de sangue. De modo geral, as
amidinas testadas, incluindo as AIAs, apresentaram superior eficácia que as drogas
de referencia, incluindo o Bz e a violeta de genciana. AIAs como a DB745 foram
ativas sobre diferentes cepas do T.cruzi, incluindo YuYu e Colombiana, que
apresentam resistência natural a nitroderivados. Estudos ultra-estruturais e por
ensaios fluorescentes (microscopia e citometria de fluxo) revelaram que o núcleo e a
mitocôndria do parasito representam potenciais alvos dos compostos estudados. No
entanto, não foi observada correlação entre atividade e maior acúmulo destes
agentes na mitocôndria (kDNA) do T.cruzi. Os ensaios in vivo demonstraram que
estes compostos aromáticos são ativos sobre modelos experimentais de infecção
aguda pelo T.cruzi, reduzindo carga parasitária e a inflamação, oferecendo 100% de
proteção na mortalidade dos animais tratados. A AIA DB1965 revelou eficácia
semelhante ao Bz e a sua combinação com esta droga de referência resultou em
100% de sobrevida e níveis superiores a 99% de supressão de parasitemia, sem
alcançar cura parasitológica avaliada pelo hemocultivo e PCR. O excelente efeito de
amdinas, em especial de AIAs contra o T. cruzi, reforça o rastreamento por novos
análogos que possam ser usados sozinhos ou em combinações com outras drogas,
para o tratamento da doença de Chagas. / The current treatment of Chagas disease (CD) is based on two old drugs, the
Nifurtimox (Nf) and benznidazole (Bz), both introduced in clinical medicine for nearly
40 years ago. Both are not considered adequate mainly due to their low activity,
especially in the chronic phase, and high toxicity and/or occurrence of parasite
strains naturally resistant to both nitro-derivatives. Then, one of the main challenges
still to be faced after more than a century after the discovery of CD is respect to need
of identifying new alternative therapies for the treatment of this neglected illness, and
this issue represents the main objective of the present thesis. Thus, in vitro and in
vivo studies were conducted to evaluate the efficacy of aromatic amidines, including
diamidines and arylimidamides (AIAs), and to evaluate the localization and
distribution of these compounds as well as their potential cellular targets upon T.
cruzi. Our data revealed trypanocidal activity of diamidines and AIAs against
bloodstream and intracellular amastigotes under micro and nanomolar range,
respectively. Some of the studied compounds, especially AIAs, DB745 and DB1831,
exhibited an outstanding effect on bloodstream forms even in the presence of blood
at 4oC, also demonstrating their potential prophylactic use in blood banks. In general,
amidines mainly AIAs, showed higher efficacy than the reference drugs, including Bz
and gentian violet. AIAs, as DB745, were active on different strains of T. cruzi,
including Colombian and YuYu, which have natural resistance to nitro-derivatives.
Ultrastructural studies and fluorescent tests (microscopy and flow cytometry)
revealed that the nucleus and mitochondria of the parasite are potential targets of the
compounds studied. However, there was no correlation between activity and greater
accumulation of these agents in the mitochondria (kDNA) of T. cruzi. In vivo testing
demonstrated that these aromatic compounds are active on experimental models of
acute infection of T. cruzi, by reducing cardiac parasite load and inflammation, and
offering 100% of protection upon the mortality of treated animals. The AIA, DB1965,
also showed similar efficacy of Bz and its combination with this reference drug
resulted in 100% survival and >99% of parasitemia suppression, without achieving,
parasitological cure assessed by blood culture and PCR. The excellent effect of
amidines (especially of AIAs) against T. cruzi, justify the screening of novel amidine
analogues that could be used alone or in combination with other drugs to treat
Chagas disease.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/5523 |
| Date | January 2011 |
| Creators | Silva, Cristiane França da |
| Contributors | Leon, Leonor Laura, Padron, Thais Cristina Baeta Soares Souto, Carvalho, Tecia Maria Ulisses de, Bahia, Maria Terezinha, Barbosa, Helene Santos, Soeiro, Maria de Nazaré Correia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | Cristiane França da Silva, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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