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Previous issue date: 2010-08-02 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The species Goupia glabra Aublet (Goupiaceae), popularly known as cupiúba is used in
popular medicine against several diseases. Their barks are used as dental analgesic, as a
vermifuge, to treat malaria, chickenpox and eczema. The leaves are used against syphilis,
ocular disorders, migraine, smallpox and as healing. This study aimed to quantify the phenolic
compounds and evaluate the antioxidant, inhibiting acetylcholinesterase, brine shrimp
toxicity, antitumor and antimicrobial activities of extracts of leaves, thin and thick branches of
cupiúba. The dry material was crushed and subjected to Soxhlet extraction using solvents in
increasing order of polarity (hexane, ethyl acetate and methanol). The phytochemical
screening was performed for different classes of metabolites, observed positive results for
sterols in all extracts and terpenoids and some classes of flavonoids in the extracts obtained in
ethyl acetate and methanol. The fractionation of the hexane extract of leaves (EHF) resulted in
the isolation of a mixture composed by β-sitosterol and stigmasterol. From ethyl acetate
extract of leaves (EAF) was isolated catechol, a simple phenol with restricted distribution in
nature. The total phenolic content of extracts was determined using the Folin-Ciocalteau and
the result was expressed as gallic acid equivalents (GAE). The antioxidant activity was
assessed by the ability of capturing the stable radical 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH ),
using quercetin as external standard, expressed as value of the effective concentration (EC50).
We observed a positive correlation between total phenolics and EC50, ie as greater the amount
of phenolics smaller is the EC50. The ethyl acetate extract of the leaves (EAF) presented the
highest antioxidant potential [EC50 = 9.76 ± 0.42 μg/mL (quartz cuvette) and EC50 = 19.87 ±
0.31 μg/mL (microplate)]. The toxicity of the extracts was verified by bioassays with
microcrustacea A. salina and expressed in percentual mortality of nauplius. Qualitative
analysis of anticholinesterase activity was performed according to the method of Ellman
(modified), presenting negative results. The antitumor activity was evaluated against four cell
lines (leukemia, breast, colon and glioblastoma) using colorimetric analysis method based on
conversion of salt 3-(4,5-dimethyl-2-thiazole)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazonium bromide (MTT)
into blue formazam by the method of Mossman. The best results were observed for the ethyl
acetate extracts, especially for cells HCT-8 (colon) that ranged from 58.35 to 77.12%. The
ethyl acetate extract obtained from thick branches (EAGg) showed values of IC50 = 13.73
μg/mL for strain HL-60 (leukemia). This extract was fractionated and the fraction EAGg5
showed the percentage of cell growth inhibition of 85.37 and 101.37% for the lines SF-295
(glioblastoma) and MDAMB-435 (breast), respectively. The antimicrobial activity was
conducted using the minimum inhibitory concentration (MIC) that was determined by
microdilution in Mueller-Hinton broth for bacteria (Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus,
Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa) and in liquid Sabouraud for fungi (Candida
albicans, C. tropicalis and C. parapsilosis). All extracts showed some degree of bacterial and
fungicidal activity, especially the ethyl acetate extracts which showed moderate inhibition of
microbial growth. The effect of extracts on growth of protozoa in vitro study was evaluated
with promastigotes of Leishmania amazonensis and epimastigotes of Trypanosoma cruzi.
EAGg extract showed antiproliferative activity against both L. amazonensis and T. cruzi, with
IC50 values of 86 and 40 μg/mL, respectively. The significant antioxidant, antitumor and
antimicrobial activities observed in the extracts of cupiuba detaches its high potential for
obtaining of biotechnological products. / A espécie Goupia glabra Aublet (Goupiaceae), denominada popularmente como cupiúba, é
utilizada na medicina popular contra diversas doenças. Suas cascas são utilizadas como
analgésico dentário, como vermífugo, no tratamento de malária, catapora e eczema. As folhas
são utilizadas contra sífilis, doenças oculares, enxaqueca, varíola e como cicatrizante. O
presente trabalho teve como objetivo quantificar compostos fenólicos e avaliar as atividades
antioxidante, inibidora de acetilcolinesterase, toxicidade em Artemia salina, antitumoral e
antimicrobiana de extratos de folhas, galhos finos e galhos grossos de cupiúba. O material
seco foi triturado e submetido à extração em aparelho de Soxhlet com solventes de polaridade
crescente (Hexano, AcOEt e MeOH). A prospecção fitoquímica foi realizada para diferentes
classes de metabólitos, sendo observados resultados positivos para esteróis em todos os
extratos, triterpenóides e algumas classes de flavonóides nos extratos obtidos em acetato de
etila e metanol. O fracionamento do extrato em hexano de folhas (EHF) resultou no
isolamento de uma mistura de β-sitosterol e estigmasterol. Do extrato em AcOEt de folhas
(EAF) foi isolado o catecol, um fenol simples de distribuição restrita na natureza. O conteúdo
de fenólicos totais dos extratos foi determinado utilizando o reagente de Folin-Ciocalteau e o
resultado foi expresso em equivalentes de ácido gálico (EAG). A atividade antioxidante foi
avaliada através da capacidade seqüestrante do radical estável 2,2-difenil-1-picrilhidrazil
(DPPH ), utilizando quercetina como padrão externo, expressos como valores de
Concentração eficiente (CE50). Foi observada uma correlação positiva entre os fenólicos totais
e a CE50, ou seja, quanto maior a quantidade de fenólicos, menor a CE50. O extrato em AcOEt
das folhas (EAF) foi o que apresentou maior potencial antioxidante [CE50=9,76 ± 0,42 μg/mL
(cubeta) e CE50= 19,87 ± 0,31 μg/mL (microplaca)]. A toxicidade dos extratos foi verificada
através de bioensaios com microcrustáceo A. salina e expressa em % de mortalidade das
larvas. A análise qualitativa da atividade anticolinesterase foi realizada de acordo com o
método de Ellman (modificado), com resultados negativos para inibição da enzima
acetilcolinesterase. A atividade antitumoral foi avaliada contra quatro linhagens de células
(leucemia, mama, cólon e glioblastoma) utilizando método de análise colorimétrica baseada
na conversão do sal 3-(4,5-dimetil-2-tiazol)-2,5-difenil-2-H-brometo de tetrazonium (MTT)
em azul de formazam segundo o método de Mossman. Os melhores resultados foram
observados para os extratos obtidos em AcOEt, principalmente para células HCT-8 (cólon)
que variaram de 58,35 a 77,12%. O extrato obtido em AcOEt dos galhos grossos (EAGg)
apresentou valor de CI50 = 13,73 μg/mL para a linhagem HL-60 (leucemia). Esse extrato foi
fracionado e a fração EAGg5 apresentou percentual de inibição de crescimento celular de
85,37 e 101,37% para as linhagens SF-295 (glioblastoma) e MDAMB-435 (mama),
respectivamente. A avaliação da atividade antimicrobiana foi realizada pelo método da
concentração inibitória mínima (MIC) que foi determinada pela técnica da microdiluição em
caldo Müeller-Hinton para bactérias (Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Escherichia
coli e Pseudomonas aeruginosa) e em meio líquido Sabouraud para fungos (Candida
albicans, C. tropicalis e C. parapsilosis). Todos os extratos demonstraram algum grau de
atividade bacteriana e fungicida, com destaque para os extratos obtidos em AcOEt que
apresentaram inibição moderada de crescimento microbiano. Para avaliar o efeito dos extratos
no crescimento dos protozoários foi realizado estudo in vitro com formas promastigotas de
Leishmania amazonensis e epimastigotas de Trypanosoma cruzi. O extrato EAGg mostrou
atividade antiproliferativa, tanto contra L. amazonensis quanto para T. cruzi, com valores de
IC50 de 86 e 40 μg/mL, respectivamente. A significativa atividade antioxidante, antitumoral e
antimicrobiana observada nos extratos de cupiúba destaca seu elevado potencial para a
obtenção de produtos biotecnológicos.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/3337 |
| Date | 02 August 2010 |
| Creators | Oliveira, Priscilla de Azevedo |
| Contributors | Veiga Júnior, Valdir Florencio da |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-graduação em Química, UFAM, BR, Instituto de Ciências Exatas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 45413454253692039, 600, 600, -8156311678363143599 |
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