Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-05-06T12:27:16Z
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2013_MartaCarolinaDeusdaraRosa.pdf: 5650381 bytes, checksum: b0f8d3a33003d27e38c48565e316d0d4 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-05-07T10:37:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1
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2013_MartaCarolinaDeusdaraRosa.pdf: 5650381 bytes, checksum: b0f8d3a33003d27e38c48565e316d0d4 (MD5) / A saliva do artrópode hematófago Rhodnius prolixus contém atividade apirásica (EC 3.6.1.5) que facilita a hematofagia inibindo a agregação plaquetária, no hospedeiro vertebrado, induzida por ADP. Este trabalho descreve a purificação de proteínas que representam membros da família das apirases da saliva de R. prolixus. O conteúdo das glândulas salivares foi injetado numa coluna Superdex 200 10/300 GL e eluída com o tampão (25 mM Tris-HCl, pH 8.0, 150 mM NaCl, 5.0 mM CaCl2) no fluxo de 0,5 ml/min. Os picos eluídos foram monitorados a 280 nm em cromatografia líquida rápida de proteínas (FPLC). As frações contendo atividade foram reunidas e submetidas à cromatografia de afinidade (coluna Hi-Trap Blue-Sepharose). Após eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), as bandas foram visualizadas por coloração com nitrato de prata. O zimograma revelou bandas proteicas entre 60 e 130 kDa que exerceram atividade apirásica. Os resultados sugerem que pode ocorrer um arranjo oligomérico entre as apirases salivares de R. prolixus. As apirases purificadas da saliva de R.prolixus são capazes de clivar nucleotídeos di- e trifosfato de maneira cálcio dependente. A purificação destas enzimas permitirá a caracterização mais detalhada de sua relação estrutura/atividade. / The saliva of the haematophagous arthropod Rhodnius prolixus contains apyrase (EC 3.6.1.5) activity that facilitates blood-feeding by inhibiting the ADP-induced aggregation of the host platelets. We report here the purification of proteins that likely represent the R. prolixus members of the apyrase family. Salivary glands content was injected into the Superdex 200 10/300 GL column and eluted with a buffer (25 mM Tris-HCl, pH 8.0, 150 mM NaCl, 5.0 mM CaCl2) at a flow rate of 0.5 ml/min. The eluted peaks were monitored at 280 nm on fast protein liquid chromatography. The fractions containing activity were pooled and subjected to affinity chromatography (Hi- Trap Blue-Sepharose column). Following sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, protein bands were detected with silver staining. As revealed by zymography, protein bands between 60 and 130 kDa exerted ATPase activity. The results suggest that oligomeric assembly among R. prolixus members with apyrase activity may occur. The purified R. prolixus apyrases are capable of cleaving nucleotide tri- and diphosphates in a calcium-dependent manner. The purification of these enzymes will allow more detailed characterization of their structure/activity relationship and it is plausible that they might be promising therapeutic molecules to target disorders of platelet aggregation.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unb.br:10482/15566 |
| Date | January 2013 |
| Creators | Rosa, Marta Carolina Deusdará |
| Contributors | Araújo, Carla Nunes de, Santana, Jaime Martins de |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UnB, instname:Universidade de Brasília, instacron:UNB |
| Rights | A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições:Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data., info:eu-repo/semantics/openAccess |
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