Helicobacter pylori, un patogeno umano in grado di colonizzare la
nicchia gastrica, è associato a patologie del tratto gastrointestinale di varia
gravità. Per sopravvivere nell’ambiente ostile dello stomaco dell’ospite, e
mettere in atto un’infezione persistente, il batterio si serve di una serie di
fattori di virulenza che includono anche le proteine Heat Shock (chaperone). I
principali geni codificanti le proteine chaperone in H. pylori sono organizzati
in tre operoni trascritti dall’RNA polimerasi contenente il fattore sigma
vegetativo σ80. La trascrizione di due dei tre operoni è regolata negativamente
da due regolatori trascrizionali, HspR e HrcA, mentre il terzo operone è
represso solo da HspR. Fino ad ora, studi molecolari per la comprensione del
ruolo di ciascuna proteina nel controllo trascrizionale dei geni heat shock sono
stati ostacolati dalla citotossicità ed insolubilità di HrcA quando espressa in
sistemi eterologhi.
In questo lavoro, è stata analizzata la sequenza amminoacidica di HrcA
ed è stata confermata sperimentalmente la predizione bioinformatica della
sua associazione con la membrana interna. La citotossicità e l’insolubilità di
HrcA in E. coli sono state alleviate inducendone l’espressione a 42°C. Saggi in
vitro con le proteine ricombinanti purificate, HspR e HrcA, hanno consentito
di definire i siti di legame dei due repressori sui promotori degli operoni heat
shock. Ulteriori saggi in vitro hanno suggerito che l’affinità di HrcA per gli
operatori è aumentata dalla chaperonina GroESL. Questi dati contribuiscono
parzialmente alla comprensione del meccanismo di repressione della
trascrizione espletato da HrcA e HspR e permettono di ipotizzare il
coinvolgimento di altri regolatori trascrizionali. L’analisi di RNA estratti dal
ceppo selvatico e dai mutanti hrcA, hspR e hrcA/hspR di H.pylori su DNAmacroarrays
non ha evidenziato il coinvolgimento di altri regolatori
trascrizionali, ma ha permesso l’identificazione di un gruppo di geni indotti da
HrcA e/ HspR. Questi geni sono coinvolti nella biosintesi e regolazione
dell’apparato flagellare, suggerendo un’interconnessione tra la risposta heat
shock e la motilità e chemiotassi del batterio.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:unibo.it/oai:amsdottorato.cib.unibo.it:60 |
| Date | 29 May 2007 |
| Creators | Roncarati, Davide <1978> |
| Contributors | Scarlato, Vincenzo |
| Publisher | Alma Mater Studiorum - Università di Bologna |
| Source Sets | Università di Bologna |
| Language | Italian |
| Detected Language | Italian |
| Type | Doctoral Thesis, PeerReviewed |
| Format | application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0782 seconds