El cáncer es una enfermedad mortal que, según la Organización Mundial de la Salud
(OMS), se considera la segunda causa de muerte en el mundo. Se recomienda
enfocarse en la detección temprana y el tratamiento para reducir la mortalidad por
cáncer. Por lo tanto, es crucial explorar nuevas tecnologías basadas en marcadores
tumorales que puedan implementarse en pruebas de detección temprana para el
diagnóstico de la enfermedad. Uno de estos biomarcadores tumorales de proteínas es
el antígeno carcinoembrionario (CEA), una glicoproteína cuya concentración es un signo
bien establecido de cáncer colorrectal, entre otros, y de metástasis. Los métodos
convencionales para la detección de CEA son los inmunoensayos.
Los inmunoensayos, basados en el uso de anticuerpos, son fundamentales en ensayos
clínicos no invasivos. Entre ellos, destaca el ensayo de flujo lateral (LFA), que utiliza una
membrana de nitrocelulosa con anticuerpos específicos para el análisis de muestras.
Aunque son económicos y eficaces, los inmunoensayos tienen limitaciones, como la
sensibilidad de los anticuerpos a cambios de pH y temperatura. Los aptámeros,
oligonucleótidos selectivos, al ser más estables y económicos, han surgido como
alternativa para detectar antígenos, ofreciendo mayor versatilidad y menor costo. Entre
ellos, por aptámeros horquilla destacan por su cambio conformacional al entrar en
contacto con el antígeno, siendo una opción prometedora para el reconocimiento
molecular.
En este trabajo se desarrolló un nanoaptasensor basado en nanotriángulos de oro
(AuNTs) con un λmax de 785 nm, los cuales fueron modificados con un aptámerohorquilla
selectivo para CEA. Se estudió el pretratamiento del aptámero previo a la
funcionalización, y se estabilizó el nanoaptasensor utilizando distintos agentes de
relleno, como 2’-deoxiadenosin-5’-trifosfato disódico (dATP), el ácido
3-mercaptopropiónico (MPA) y cadenas de polietilenglicol tiolado con dos grupos
funcionales diferentes (HS-PEG(7)-OMe y HS-PEG(8)-COOH).
En los ensayos preliminares de detección de CEA en solución (0, 5 y 10 μg/mL), se
evaluaron los nanoaptasensores preparados. Posteriormente, se llevó a cabo la
optimización de las tiras de flujo lateral utilizando nanotriángulos con un λmax de
1100 nm. Se consideraron parámetros como el pretratamiento de la almohadilla de
conjugado, el medio del nanoaptasensor, el running buffer y el tipo de nitrocelulosa.
Después de la optimización, se evaluó el desempeño del nanoaptasensor basado en los
AuNTs con una λmax de 785 nm, modificados con el aptámero-horquilla y dATP, el cual
mostró los mejores resultados en los ensayos preliminares en solución. La detección de
CEA se probó con distintas concentraciones del biomarcador (0,18, 45, 90, 180 y 1800
ng/mL) mediante la técnica LFA. Además, se estudiaron los ensayos LFA mediante
colorimetría y SERS. Los resultados indicaron que el nanoaptasensor permitió discernir
concentraciones de CEA en el rango de 90 ng/mL mediante colorimetría, y
concentraciones de hasta 4.5 ng/mL por SERS.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:PUCP/oai:tesis.pucp.edu.pe:20.500.12404/27566 |
| Date | 27 September 2024 |
| Creators | Licuona Puma, Mary Carmen |
| Contributors | Hernández García, Yulán |
| Publisher | Pontificia Universidad Católica del Perú, PE |
| Source Sets | Pontificia Universidad Católica del Perú |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf, application/pdf |
| Rights | Atribución-NoComercial 2.5 Perú, info:eu-repo/semantics/embargoedAccess, http://creativecommons.org/licenses/by-nc/2.5/pe/ |
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