Orientadora: Prof. Dra. Marcella Pecora Milazzotto. / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2015. / A bioenergia destaca-se como um substituto relevante para os combustíveis fósseis e os A capacidade de selecionar o embrião com maior viabilidade para transferência às receptoras é um componente crucial para o sucesso das técnicas de reprodução assistida. Atualmente, avaliações morfológicas são utilizadas para selecionar os embriões com maior potencial de implantação, e apesar de se tratar de um método não invasivo e relativamente bem sucedido, ainda apresenta uma série de limitações. Nos últimos anos, o desenvolvimento de novas tecnologias tem possibilitado análises quantitativas e qualitativas para determinação da viabilidade dos embriões para melhoria da seleção embrionária. Em especial as tecnologias espectroscópicas e espectrométricas permitiram o desenvolvimento de novos métodos para a caracterização embrionária e predição do potencial de estabelecimento da prenhez. Assim, o objetivo deste trabalho foi a caracterização não invasiva de embriões bovinos pela análise dos perfis espectroscópicos e espectrométricos dos meios de cultivo de embriões com diferentes cinéticas de desenvolvimento visando a obtenção de padrões específicos baseados no fenótipo embrionário. Para isso, embriões bovinos foram produzidos in vitro por protocolos convencionais. Os zigotos foram transferidos para meios de cultivo individualmente e classificados em dois grupos: rápido (4 células-40hpi) e lento (2 ou 3 células-40hpi). Os meios de cultura foram coletados às 40, 96 e 168 horas pós-inseminação (hpi), tranferidos para criotubos e congelados a -80ºC até o momento das análises. A análise do metaboloma embrionário foi realizada por espectroscopia Raman. Para tal, gotas de meios de cultura foram cobertas com óleo mineral, sendo escaneadas por um sistema Raman triplo. Os dados foram normalizados e analisados por Análises de Componentes Principais (PCA), de Agrupamentos (Clusters) e por Loading plot. A análise do secretoma embrionário foi feita por MALDI-MS-TOF, através da extração dos metabólitos, sendo os espectros adquiridos pelo espectrômetro em modo de ionização positiva. Foram feitas analises estatísticas univariadas e multivariadas pelo software online Metaboanalyst. Os resultados obtidos pela espectroscopia Raman e espectrometria de massas demonstram que embriões com diferentes cinéticas de desenvolvimento possuem diferentes perfis espectroscópicos e espectrométricos ao longo do desenvolvimento embrionário, indicando que estes embriões consomem e/ou produzem diferencialmente metabólitos nos meios de cultura. Com base em nossos resultados, propomos com este estudo que a análise dos meios de cultura por espectroscopia Raman pode ser utilizada para fins de diagnóstico embrionário, pois permite uma caracterização rápida e global dos perfis embrionários relacionados a cinética, enquanto a espectrometria de massas pode ser utilizada para caracterização qualitativa dos embriões, permitindo a identificação do secretoma de embriões durante o cultivo in vitro. / The ability to select embryo with greater viability to transfer to the receptors is a crucial component to the success of assisted reproduction techniques. Currently, morphological assessments are used to select embryos with the highest implantation potential, although it¿ s a noninvasive and relatively successful, has still a number of limitations. In recent years, the development of new technologies has enabled quantitative and qualitative analyzes for the determination of viability of embryos to improve embryo selection. In particular spectroscopic and spectrometric technologies have permitted the development of new methods for embryo characterization and prediction of potential establishment of pregnancy. The objective of this study was non-invasive characterization of bovine embryos by analysis of spectroscopic and spectrometric profiling of embryo culture media with different kinetics of development in order to obtain specific patterns based on embryonic phenotype. For this, bovine embryos were produced in vitro by standard protocols. The zygotes were transferred to individual culture medium and divided into two groups: Fast (4 cells-40hpi) and slow (2 or 3 cells-40hpi). The culture media were collected at 40, 96 and 168 hours post-insemination (hpi) tranfered to cryotubes and frozen at -80 until the time of analysis. The analysis of the metabolome embryo was made by Raman spectroscopy. For this, droplets of culture media were overlaid with mineral oil being scanned by a triple Raman system. The data were normalized and analyzed by Principal Component Analysis (PCA), clusters and Loading plot. Analysis of embryonic secretome was made by MALDI-TOF-MS, through the extraction of the metabolites, and the spectra acquired by the spectrometer in positive ionization mode. Analyzes were performed univariate and multivariate statistics by the online software Metaboanalyst. The results obtained by Raman spectroscopy and mass spectrometry demonstrated that the development of embryos with different kinetics have different spectroscopic and spectrometric profiles during embryonic development, indicating that these embryos consume and /or produce differentially metabolites in the culture media. Based on our results, we propose that the analysis of Raman spectroscopy culture media may be used for diagnostic purposes embryo, since it allows a fast and comprehensive characterization of embryonic profiles related to kinetics, while mass spectrometry can be used for qualitative characterization of the embryo, allowing the identification of secretome embryo during in vitro culture.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:BDTD:90435 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Santos, Érika Cristina dos |
| Contributors | Centeno, Danilo da Cruz, Milazzotto, Marcella Pecora, Martinho, Herculano da Silva, Assumpção, Mayra Elena Ortiz D'Avila |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf, 100 f. : il. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFABC, instname:Universidade Federal do ABC, instacron:UFABC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=90435&midiaext=71987, http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=90435&midiaext=71988, Cover: http://biblioteca.ufabc.edu.brphp/capa.php?obra=90435 |
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