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DISSERTACAO DEFINITIVA c ficha catalografica.pdf: 2149699 bytes, checksum: ebcbff0f45d07e12d12a9708947a59eb (MD5)
Previous issue date: 2009-07-15 / Tyrosinase (E.C.1.14.18.1) is an enzyme of industrial interest that catalyses the ohydroxylation
of monophenols (monophenolase activity) and the oxidation of o-diphenols to
reactive o-quinones (diphenolase activity), both reactions using molecular oxygen.
Pycnoporus sanguineus (L. ex Fries) Murril, is a white rot fungi capable of producing
tyrosinase and widely distributed in nature. It is found in regions of mild climate and in
tropical forest. The production and characterization of tyrosinase from P. sanguineus were
investigated. The selection of inductors, determination of the luminosity influence, biomass
and culture media in the production of tyrosinase and the effect of inhibitors on enzyme
activity were determined. The fungus produced intracellular tyrosinase and the higher activity
was observed using 0.15% L-tyrosine as inducer, in the presence of light, with inoculum of 10
mycelium discs, medium malt extract broth 2%, incubation at 30°C, and constant agitation of
150 rpm, during 2 days. 6 mmol.L-1 salicylhydroxamic acid (SHAM) and 6 mmol.L-1
phenylthiourea (PTU) inhibited 100% of the tyrosinase activity. 0.1 mmol.L-1 sodium azide
inhibited 4.15% of tyrosinase activity, while no inhibition was observed after addition of 0.1
mmol.L-1 of phenylmethanesulfonyl fluoride (PMSF). Using L-dopa as substrate, the
intracellular crude extract presented optimum pH of 6,6, optimum temperature of 45°C, low
stability at 50°C, maintaining about 50% of the activity after 15 min of incubation. The
tyrosinase production was confirmed by non-denaturing polyacrylamide gel electrophoresis,
using commercial fungal tyrosinase as positive control / A tirosinase (E.C.1.14.18.1), também conhecida como polifenoloxidase ou catecolase, é uma
enzima de interesse industrial que catalisa a o-hidroxilação de monofenóis (atividade
monofenolase) e a subseqüente oxidação do o-difenol resultante em o-quinonas reativas
(atividade difenolase), usando oxigênio molecular. O Pycnoporus sanguineus (L. ex Fries)
Murril, um fungo de decomposição branca (white rot) capaz de produzir a tirosinase, é
amplamente distribuído na natureza, sendo encontrado em regiões de clima mais ameno e em
florestas tropicais. A produção e caracterização da tirosinase produzida por P. sanguineus foi
investigada. Foi realizada seleção de indutores, determinação da influência da luminosidade,
biomassa e meios de cultura na produção de tirosinase, bem como o efeito de inibidores sobre
a atividade enzimática. O extrato bruto enzimático foi caracterizado quanto ao pH ótimo,
temperatura ótima e termoestabilidade. Os resultados obtidos demonstraram que o fungo
produziu tirosinase intracelular e a mais alta atividade ocorreu com a utilização de 0,15% de
L-tirosina como indutor, na presença de luz, com inóculo de 10 discos de micélio fúngico,
meio caldo extrato de malte 2%, incubação à 30°C e agitação de 150 rpm, durante 2 dias.
Ácido salicilhidroxâmico (SHAM) 6 mmol.L-1 e feniltiouréia (PTU) 6 mmol.L-1 inibiram
100% da atividade de tirosinase. Azida sódica 0,1 mmol.L-1 inibiu 4,15% da atividade de
tirosinase, enquanto nenhuma inibição foi observada após adição de fluoreto de
fenilmetanosulfonil (PMSF) 0,1 mmol.L-1. Utilizando a L-dopa como substrato, o extrato
bruto intracelular apresentou pH ótimo de 6,6, temperatura ótima de 45°C, baixa estabilidade
à temperatura de 50°C, mantendo apenas cerca de 50% de atividade após 15 minutos de
incubação. A produção da tirosinase foi comprovada através de eletroforese em gel de
poliacrilamida não desnaturante, tendo como controle positivo tirosinase fúngica comercial
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tde/2127 |
| Date | 15 July 2009 |
| Creators | DUARTE, Livia Teixeira |
| Contributors | BARA, Maria Teresa Freitas, SANTIAGO, Mariângela Fontes |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Mestrado em Ciências Farmacêuticas, UFG, BR, Ciências da Saúde - Farmácia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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