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Previous issue date: 2015-02-23 / FACEPE / Este trabalho teve como objetivos realizar um screening com diversas espécies da Caatinga, isolar, caracterizar e testar quimicamente moléculas bioativas presentes nas folhas de Manilkararufula (Maçaranduba), visando agregar valor biotecnológico às plantas desse bioma. Foram avaliadas 28 espécies vegetais quanto à presença de lectinas, a partir do teste de atividade hemaglutinante (AH), e inibição de tripsina. Utilizando aparelho soxhlet deferentes extratos orgânicos foram preparados, em ordem eluotropica, com folhas de M. rufula, utilizando os solventes clorofórmio, acetato de etila e metanol, e o perfil fitoquímico dos extratos obtidos traçado por cromatografia em camada delgada (CCD). Testes de atividade antioxidante,invitro, com os extratos foram realizados pelos métodos de DPPH e Fosfomolibidênio, e os mesmos tiveram ainda seus conteúdos de flavonoides determinados. A ação protetora de DNA também foi avaliada para os extratos e a lectina obtida.A atividade antimicrobiana foi realizada por diluição seriada em microplaca contra seis espécies de bactérias.Neste estudo foi avaliada ainda a atividade termiticida para cada um dos extratos obtidos.Uma lectina foi obtida a partir do extrato salino das folhas de M.rufula, aprengando-se métodos tradicionais de purificação, como fracionamento salino e cromatografia de afinidade. Dentre as espécies analisadas, 20 apresentaram AH, onde as concentrações proteicas nos extratos salinos variaram de 0,95 a 20,88 mg/mL, e 21 foram capazes de inibir, em seus extratos, a atividade de tripsina em algum nível. O ensaio em CCD revelou pouca diversidade de compostos secundários nas folhas de M. rufula, sendo encontrados heterosídeos cianogênicos, flavonoides, triterpenos, esteroides e taninos. Os melhores resultados de atividade antioxidante foram obtidos com os extratos preparados com metanol e acetato de etila, os quais apresentaram excelente sequestro de radicais livres a uma concentração de 200 μg/mL. Nestes extratos também foram encontradas uma alta concentração de compostos fenólicos e flavonódies, os mesmos também apresentaram atividade protetora de DNA e mostraram-se eficazes como agentes antimicrobianos, atuando contra algumas cepas de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Os três extratos obtidos apresentaram atividade termiticida com eliminação de 100% dos insetos em até 48 horas. A lectina foi obtida por cromatografia em suporte de quitina e mostrou-se altamente termoestável, mantendo sua AH mesmo quando submetida a estresses de calor e resistente a variações de pH. A lectina não teve sua AH alterada pela presença de íons, e em SDS-PAGE observou-se a presença de duas bandas com 42,3 e 36,2 kDa. Esta proteína também apresentou atividade protetora de DNA e antibacteriana contra M. luteus. Este é o primeiro relato que apresenta M. rufula como uma espécie vegetal com potencial biotecnológico, tornando-a uma promissora fonte de novos compostos bioativos. / This work had as objectives to perform a screening with several species from Caatinga, isolate, characterize and test chemically bioactive molecules present in the leaves of Manilkara rufula (maçaranduba), aiming to add value to this biome plant biotechnology. Twenty eight plant species were evaluated for the presence of lectins, from the hemagglutinating activity (AH) and inhibition of trypsin. Using soxhlet apparatus different organic extracts were prepared, in order eluotropic, with leaves of M. rufula, using solvents chloroform, ethyl acetate and methanol. The phytochemical profile of extracts obtained charted by thin-layer chromatography (TLC). Testing of antioxidant activity in vitro with extracts were carried out by methods of DPPH and phosphomolybdeno and they even had their content of flavonoids determined. The protective action of DNA has also been evaluated for lectin and extracts. The antimicrobial activity was performed by serial dilution in microplate against six species of bacteria. In this study was to evaluate the termiticide activity for each of the extracts obtained. A lectin was obtained from the saline extract of leaves of M. rufula, utility traditional methods of purification, as salt fractionation and affinity chromatography. Among the species analyzed, 20 presented AH, where protein concentrations in saline extracts ranged from 0.95 to 20.88 mg/mL, 21 were able to inhibit, in their statements, the activity of trypsin on some level. The test in TLC revealed little diversity of secondary compounds in this tissue, and found cyanogenic glycosides, flavonoids, triterpenes, steroids and tannins. The best results were obtained with antioxidant activity of the extracts prepared from methanol and ethyl acetate, which showed excellent scavenging free radicals at a concentration of 200/mL. In these extracts were also found a high concentration of phenolic compounds and flavonods, the same also presented protective activity of DNA and proved effective as antimicrobial agents, acting against a few strains of Gram-positive and Gram-negative bacteria. The three extracts obtained showed termiticide activity with 100% elimination of insects within 48 hours. The lectin was obtain by chromatography on chitin support and was highly thermostable, maintaining its HA even when subjected to heat and resistant to pH changes. The lectin did not have its HA amended by presence of ions, and SDS-PAGE showed the presence of two bands with 42.3 and 36.2 kDa. This protein also presented DNA and antibacterial protective activity against m. luteus. This is the first report that presents M. rufula as a species with biotechnological potential, making it a promising source of new bioactive compounds.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/25573 |
| Date | 23 February 2015 |
| Creators | ARCOVERDE, José Helton de Vasconcelos |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/0114396476914548, CUNHA, Maria das Graças Carneiro da, CORREIA, Maria Tereza dos Santos |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Ciencias Biologicas, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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