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Previous issue date: 2011-07-13 / The aim of this study, divided into two trials was to evaluate the beneficial effect of retinoids (retinol - RT; retinoic acid - RA) and growth factor (IGF-I) on in vitro production of goat embryos, and to evaluate apoptosis through the activity of enzymes of group II caspases and DNA fragmentation by TUNEL assay. In the first experiment, divided into three groups (CG, GRT and GAR), was evaluated apoptosis of goat oocytes and embryos undergo maturation in vitro in culture medium with or without RT and HR. The second experiment was divided into two treatments, the treatment was first investigated the efficiency of both retinoids distributed in oocytes in TCM 199, and the second treatment was investigated the efficacy of RT, RA, or IGF-I of zygotes in KSOM medium using the same means in conjunction with the monolayer of oviduct cells (MCO). A total 4320-cumulus-oocyte complex obtained by aspiration from follicles (2-6 mm in diameter) ovarian animals slaughtered in abattoirs were selected for IVM and incubated in TCM 199 at 39 º C in air with 5% CO2 for 24 hours. Thereafter, the oocytes were processed through mDM and exposed to sperm for 18 hours. Presumptive zygotes were placed in drops of KSOM medium enriched with RT, RA, or IGF-I. At the end of the 10th day of co-culture blastocysts were prepared for the location of characteristic changes of apoptosis using the reagent PhiPhiLux-G1D2 and solutions of 4% paraformaldehyde and Phosphate-Buffered Saline + 1 mg / ml polyvinylpyrrolidone . In the first experiment, the activity of caspase enzymes did not differ (P> 0.05) between oocytes in the CG (7,20±0,91), GRT (6,60±0,68) and the GAR (7,30±0,67) and between the GRT and the GAR. The oocytes and blastocysts positive for TUNEL assay were higher (P <0.05), respectively, in the CG (8,20±0,78; 8,70±1,05) than in GRT (5,60±0,52; 4,80±0,51 ) and the GAR (6,40±0,69; 5,40±0,69), no difference (P> 0.05) between the GRT and the GAR. Zygotes GC had lower (P <0.05) capacity development to the blastocyst stage (5.32 ± 0.81) than those of the GRT (7.94 ± 0.93) and GAR (7.36 ± 1.02), no difference (P> 0.05) between the GRT and the GAR.In the second experiment, the results showed that the groups of oocytes and embryos treated only with retinoids produced fewer blastocysts (P <0.05) than in groups of oocytes and embryos treated with retinoids associated with IGF-I. As to the blastocyst positive for apoptosis, is assessed by the activity of enzymes caspazes or DNA fragmentation, there was no difference (P> 0.05) between groups. It is concluded that the addition of retinoids to oocytes maturation medium reduced apoptosis and cell association of retinoids with IGF-I is beneficial and can be recommended to enhance in vitro production of goat embryos. / O objetivo deste estudo, dividido em dois experimentos, foi avaliar o efeito benéfico dos retinóides (retinol – RT; ácido retinóico – AR) e do fator de crescimento (IGF–I) na produção in vitro de embriões caprinos, bem como avaliar a apoptose através da atividade das enzimas caspases do grupo II e da fragmentação de DNA pelo teste de TUNEL. No primeiro experimento, dividido em três grupos (GC, GRT e GAR), foi avaliado a apoptose de oocitos e embriões caprinos submetidos à maturação in vitro em meio de cultivo contendo ou não RT e AR. O segundo experimento foi dividido em dois tratamentos, sendo no primeiro tratamento foi investigada a eficiência de ambos os retinóides nos oocitos distribuídos em meio TCM 199, e no segundo tratamento foi investigado a eficácia do RT, AR ou IGF-I dos zigotos em meio KSOM utilizando-se os mesmos meios em conjunto com a monocamada de células de oviduto (MCO). Um total 4320 oócitos-cumulus-complexo obtidos por aspiração de folículos (2-6 mm de diâmetro) ovarianos de animais abatidos em matadouro foram selecionados para MIV e incubados em TCM 199 a temperatura de 39º C em ar com 5% de CO2 durante 24 horas. Ao final deste período, os oocitos foram processados em meio mDM e expostos aos espermatozóides por 18 horas. Os presumíveis zigotos foram depositados em gotas do meio KSOM enriquecidos com RT, AR ou IGF-I. Ao final do 10º dia da co-cultura os blastocistos foram preparados para a localização das alterações características da apoptose utilizando-se o reagente PhiPhiLux-G1D2 e as soluções de paraformaldeído a 4% e de Phosphate-Buffered Saline + 1 mg/mL de Polivinilpirrolidona. No primeiro experimento, a atividade das enzimas caspases não diferiu (P > 0,05) entre os oócitos do GC (10,32%), do GRT (8,08%) e do GAR (8,45%), bem como entre a do GRT e do GAR. Os oócitos e blastocistos positivos para o teste de TUNEL foram maiores (P < 0,05), respectivamente, no GC (11,46%; 9,22%) do que no GRT (6,86%; 5,45%) e no GAR (7,41%; 6,12%), não existindo diferença (P > 0,05) entre os do GRT e do GAR. Os zigotos do GC apresentaram menor (P < 0,05) capacidade de desenvolvimento até o estádio de blastocito (5,32 ± 0,81) do que aqueles dos GRT (7,94 ± 0,93) e GAR (7,36 ± 1,02), não existindo diferença (P > 0,05) entre os do GRT e do GAR. Já no segundo experimento, os resultados mostraram que os grupos de oócitos e embriões tratados somente com retinóides produziram menos blastocistos (P < 0,05) do que nos grupos de oócitos e embriões tratados com retinóides associados ao IGF-I. Quanto aos blastocistos positivos para apoptose, seja avaliada pela atividade das enzimas caspazes ou pela fragmentação do DNA, não foi verificada diferença (P > 0,05) entre os grupos experimentais. Conclui-se que a adição de retinóides ao meio de maturação de oocitos diminui a atividade apoptótica celular e a associação dos retinoides com o IGF-I é benéfica e pode ser recomendada para aumentar a produção in vitro de embriões da espécie caprina.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede2:tede2/5697 |
| Date | 13 July 2011 |
| Creators | CONCEIÇÃO, Juliana Costa da |
| Contributors | OLIVEIRA, Marcos Antonio Lemos de, SANTOS JUNIOR, Edivaldo Rosas dos, LIMA, Paulo Fernandes de, CHAVES, Ricardo de Macêdo, OLIVEIRA, Divânia Fonseca Franco de |
| Publisher | Universidade Federal Rural de Pernambuco, Programa de Pós-Graduação em Ciência Veterinária, UFRPE, Brasil, Departamento de Medicina Veterinária |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRPE, instname:Universidade Federal Rural de Pernambuco, instacron:UFRPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | -3061482854177903105, 600, 600, 600, -3020210563763616780, 453670264235017319 |
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