FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O Nordeste brasileiro possui aproximadamente quase metade do rebanho ovino brasileiro, estimado em vinte milhÃes de animais. Das raÃas aqui criadas, destacam-se as raÃas Santa InÃs e Morada Nova que tÃm bom desenvolvimento corporal, ganho de peso e boa adaptaÃÃo ao clima tropical. Recentemente mostrou-se o perfil protÃico de carneiros maduros atravÃs das tÃcnicas de eletroforese bidimensional associada à espectrometria de massa, onde vÃrias proteÃnas foram identificadas, entre elas as RSVPs 14 e 22 kDa, pertencentes à famÃlia das BSPs e as bodesinas â 1 e 2, que fazem parte da famÃlia das espermadesinas, bem como as alteraÃÃes que sofre o perfil protÃico do plasma seminal dos animais durante o desenvolvimento reprodutivo, simultaneamente a mudanÃas nos parÃmetros de motilidade e concentraÃÃo espermÃtica, embora a associaÃÃo entre a expressÃo protÃica dessas proteÃnas com parÃmetros reprodutivos e medidas testiculares ainda nÃo tenham sido feitas no nordeste do Brasil. Amostras de sÃmen foram coletadas de 21 carneiros adultos Santa InÃs e 11 da raÃa Morada Nova com normalidade reprodutiva e idade mÃdia de dois anos. O plasma seminal foi obtido atravÃs da centrifugaÃÃo e submetido à eletroforese bidimensional, sendo os spots que diferiram estatisticamente entre os grupos de animais de alta (G1) e baixa motilidade (G2) foram digeridos com tripsina e submetidos a espectometria de massa e pesquisa em banco de dados para identificaÃÃo. Os gÃis foram corados com Cromassie coloidal, digitalizados e analisados no aplicativo PDQuest e as quantidades dos spots estimados quantitativamente. Avaliaram-se, entÃo, associaÃÃes estatÃsticas entre estas variÃveis e os parÃmetros reprodutivos como, circunferÃncia escrotal (CE), percentual de cÃlulas mÃveis (PEM) e total de defeitos espermÃticos maiores (TDM) dos animais Santa InÃs e CircunferÃncia escrotal (CE), Motilidade Individual Progressiva (MIP), Percentual de cÃlulas mÃveis (PEM), ConcentraÃÃo espermÃtica (CONC) e Motilidade Massal (MM) para os animais Morada Nova. Em mÃdia foram detectados 236Â7,65 spots por gel, de acordo com o pareamento gerado pelo aplicativo PDQuest para a raÃa Santa InÃs e 261 15,09 spots por gel do plasma seminal dos animais Morada Nova, variando entre 182 e 375 spots por gel. Para a raÃa Santa InÃs um total de 63 spots foi identificado consistentemente em todos os gÃis, o que representou 41,5% da intensidade todos os spots detectados. Para os animais Morada Nova, um total de 98 spots foram detectados de forma consistente em todos os gÃis. A intensidade desses spots somou 60,82% da intensidade de todos os spots mostrados no gel master. Foi observado a grande expressÃo de proteÃnas de baixo peso molecular (14,5 a 18,4 kDa) e pI variando de 4,2 a 5,9.para a raÃa Santa InÃs. Do total mÃdio de 236 spots encontrados, treze spots apresentaram diferenÃa significativa (p<0,05) entre animais de alta e baixa motilidade, sendo dez spots mais intensos em animais de alta motilidade e trÃs em animais de baixa motilidade. ApÃs digestÃo dos spots e identificaÃÃo por espectometria de massa esses spots foram identificados como as proteÃnas Arilsulfatase A e Zinco alfa 2 glicoproteÃna, mais intensas no G1 e RSVP-22 e Bodesina-2 com maior expressÃo no grupo G2. Para a raÃa Morada Nova , quatro spots apresentaram diferenÃa significativa (p<0,05) para o parÃmetro percentual de cÃlulas mÃveis (PEM). ApÃs digestÃo dos spots e identificaÃÃo por MALDI-Tof-Tof, foram identificadas as proteÃnas RSVP-14, RSVP-22, ProteÃna α-1 do complexo-t e aldose redutase, sendo todas mais intensas em animais de alta motilidade (G1). Em um segundo estudo, foi avaliada a influÃncia de diferentes fontes de proteÃna da dieta (farelo de soja, feno de folha de leucena e torta de algodÃo) e de nitrogÃnio nÃo- protÃico (urÃia) sobre o peso corporal, desenvolvimento testicular e qualidade espermÃtica dos animais estudados, bem como a expressÃo de proteÃnas no plasma seminal dos animais potencialmente relacionadas Ãs dietas. Foram utilizados 20 cordeiros da raÃa Morada Nova com idade variando entre 24 e 39 semanas. Para os critÃrios de desenvolvimento testicular (cirrcunferÃncia escrotal, espessura testicular, largura testicular e comprimento testicular) nÃo houve diferenÃa significativa (p<0,05). ao final do perÃodo experimental
Animais alimentados com torta de algodÃo tiveram um aumento significativo do peso corporal (p<0,05), quando comparado com feno de leucena. No mesmo perÃodo, o peso corporal dos animais alimentados com feno de leucena, soja e urÃia foi semelhante. DiferenÃas entre os tratamentos (p <0,05) foram observadas apenas para motilidade progressiva individual e defeitos totais. O sÃmen dos animais alimentados com dietas contendo feno de leucena apresentou baixa motilidade progressiva individual quando comparados aqueles alimentados com dietas contendo farelo de soja. No entanto, animais alimentados com dietas contendo torta de algodÃo e urÃia tinham valores semelhantes para a motilidade progressiva. Quando os defeitos totais foram analisados, houve uma diferenÃa significativa entre os grupos de feno de leucena e urÃia.
Foi detectado uma quantidade de 246,6  13,9, 236,0  12,4, 261,2  20,2 e 243,8  20,5 spots por gel nos grupos de farelo de soja, feno de folhas de leucena, torta de algodÃo e urÃia, respectivamente. NÃo houve diferenÃas significativas no nÃmero de spots por gel, entre os grupos. DiferenÃas significativas (p <0,05) foram observadas nas intensidades de doze spots dos mapas protÃicos. Foi observado um aumento da expressÃo do spot S8707 (62,8 kDa, pI 6,9 ) em animais alimentados com feno de folhas de leucena, quando comparados Ãqueles alimentados com farelo de soja, bem como correlaÃÃo negativa com a motilidade progressiva individual (MPI). Estas observaÃÃes indicam que fatores presentes no feno de folhas de leucena promovem um aumento na expressÃo da proteÃna (S8707), o que provavelmente provoca alteraÃÃes deletÃrias no mecanismo que controla a motilidade progressiva da cÃlula espermÃtica, jà que neste grupo observou-se valores mais baixos para MPI. / The Brazilian Northeast has about almost half of Brazilian sheep livestock, estimated at twenty million animals. The races created here, Santa Ines and Morada Nova stand out because they have good physical development, weight gain and good adaptation to the tropical climate. Recently showed the protein profile of mature rams through the techniques of two-dimensional electrophoresis associated with mass spectrometry, which several proteins have been identified, including those RSVPs 14 and 22 kDa, belonging to the family of BSPs and bodesinas - 1 and 2, that are part of the family of espermadesinas as well as the changes suffered by the protein profile of seminal plasma of animals during reproductive development, while changes in the parameters of sperm concentration and motility, although the association between the protein expression of these proteins with reproductive parameters testicular and measures have not yet been made in northeastern Brazil. Semen samples were collected from twenty-one adult sheep Santa Ines and eleven Morada Nova with normal reproductive and mean age of two years and seminal plasma was obtained by centrifugation and subjected to two-dimensional electrophoresis, and the spots that differed significantly between the groups of animals from high (G1) and low motility (G2) were digested with trypsin and subjected to mass spectrometry and research database for identification. The gels were stained with colloidal Cromassie, scanned and analyzed with PDQuest application and quantity of the spots quantitatively estimated. Evaluated, then, statistical associations between these variables and the reproductive parameters scrotal circumference (EC), percentage of motile cells (PEM) and total sperm defects (MDD) of the animals Santa InÃs and scrotal circumference (EC) motility individual rogressive (MIP), percentage of motile cells (PEM), Sperm concentration (CONC) and Massal motility (MM) for the animails Morada Nova. Were detected on average 236  7.65 spots per gel, according to the pairing generated by PDQuest application to the Santa Ines and 261  15.09 spots per gel in the seminal plasma of animals Morada Nova, ranging between 182 and 375 spots gel. For Santa InÃs a total of 63 spots were identified consistently in all gels, which represented 41.5% of all spots detected intensity. For Morada Nova animails, a total of 98 spots were detected consistently in all gels. The intensity of these spots amounted to 60.82% of the intensity of all spots shown on the master gel was observed a great expression of proteins of low molecular weight (14.5 to 18.4 kDa) and pI ranging from 4.2 to 5, 9. to Santa Ines. The average total of 236 spots found thirteen spots showed significant difference (p <0.05) between animals of high and low motility, being more intense ten spots in animals with high motility and three in animals with low motility. After digestion of spots and identification by mass spectrometry these spots were identified as proteins Arylsulfatase A and zinc alpha 2 glycoprotein more intense in G1and RSVP-22 and Bodesina with higher expression in G2. For the Morada Nova race, four spots showed significant difference (p <0.05) for the parameter percentage of motile cells (PEM). After digestion of spots and identification by MALDI-TOF-TOF, we identified as proteins, RSVP-14, RSVP-22, a protein α-1 of t-complex and aldose reductase, which are all more intense in animals with high motility (G1). In a second study, evaluated the influence of different sources of dietary protein (soybean meal, leucaena leaf hay and cottonseed meal) and non-protein nitrogen (urea) on body weight, testicular development and sperm quality of the animals studied and protein expression in the seminal plasma of the animals potentially related to the diets. We used 20 Morada Nova lambs aged between 24 and 39 weeks. For the testicular development criteria (cirrcunferÃncia scrotal, testicular thickness, width and length testicular testicular) no significant difference (p <0.05) was observed at the end of experiment. Animals fed cottonseed meal had a significant increase in body weight (p <0.05) compared with Leucaena hay. In the same period, the body weight of animals fed leucaena hay, soybeans and urea was similar. Differences between treatments (p <0.05) were observed only for individual progressive motility and total defects. The semen of animals fed diets containing leucaena showed low motility individual when compared with those fed diets containing soybean meal. However, animals fed diets containing cottonseed meal and urea had similar values for progressive motility. When the total defects were analyzed, there was a significant difference between groups of leucaena hay and urea. Detected an amount of 246.6  13.9, 236.0  12.4, 261.2  20.2 and 243.8  20.5 spots per gel in groups of soybean meal, leucaena leaf hay, cottonseed meal and urea, respectively. No significant differences in the number of spots per gel, in both groups. Significant differences (p <0.05) were observed in the intensities of twelve spots in the proteic maps . An increased expression of spot S8707 (62.8 kDa, pI 6.9) in animals fed with hay and leaves of leucaena compared to those fed soybean meal, and a negative correlation with individual motility (MPI .) These observations indicate that factors present in hay sheets leucaena promote an increase in protein expression (S8707), the likely cause deleterious changes in the mechanism controlling the motility of sperm cells, as observed in this group lowest for MPI.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:5268 |
| Date | 30 September 2011 |
| Creators | Marco Antonio de MagalhÃes Rodrigues |
| Contributors | Arlindo de Alencar Araripe Moura, Airton Alencar de AraÃjo, Davide Rondina, Carlos Eduardo Azevedo Souza |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Biotecnologia (Rede Nordeste de Biotecnologia - RENORBIO), UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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