L'activation des cellules endothéliales par le vascular endothelial growth factor (VEGF) conduit à la formation d'un complexe contenant le VEGFR2 et l'intégrine avp3. Dans ce projet de recherche, nous avons cherché à déterminer les mécanismes par lesquels l'association des récepteurs VEGFR2- avp3 régule l'activation de la kinase d'adhérence focale (FAK) par le VEGF. La constitution du complexe VEGFR2-avp3 est associée au recrutement de la protéine chaperonne Heat shock protein 90 (HSP90) sur le VEGFR2. L'interaction de ce dernier avec HSP90 implique les 130 derniers acides aminés du récepteur et est nécessaire à l'activation de la petite GTPase RhoA et de la RhoA dépendant kinase (ROCK) en réponse au VEGF. L'activation de la kinase ROCK conduit par la suite et de manière directe, à la phosphorylation de FAK sur le résidu serine 732. Ceci entraîne un changement de conformation dans la structure tridimensionnelle de FAK qui rend son résidu tyrosine 407 accessible à la phosphorylation par un membre de la famille de protéines FAK à activité tyrosine kinase non récepteur : la Proline-rich tyrosine kinase- 2 (Pyk2). Pyk2 est en effet activée par le VEGF en aval de l'intégrine av|33. Ces résultats ont été confirmés par l'utilisation de siRNA ciblant ROCK et Pyk2. La phosphorylation des résidus serine 732 et tyrosine 407 sont tous deux impliqués dans le recrutement de la vinculine aux plaques ventrales dans les cellules endothéliales en réponse au VEGF. Finalement, en utilisant des cellules embryonnaires MEF FAK-/- et des siRNA ciblant FAK dans les cellules HUVEC, nous avons démontré le rôle crucial de la phosphorylation de ces deux résidus dans la migration cellulaire. Nos résultats montrent pour la première fois que l'activation des voies VEGFR2/ HSP90/ ROCK-Ser732 et de l'intégrine avp3/ Pyk2-Y407 en réponse au VEGF sont toutes deux nécessaires aux fonctions par lesquelles FAK régule le recrutement de protéines aux points focaux d'adhérence et la migration cellulaire. / Exposure of endothelial cells to vascular endothelial growth factor (VEGF) induces the formation of an oligomeric complex that contains VEGFR2 and integrin avp3. In the present study, we investigated the mechanisms by which HSP90 and the VEGFR2-avp3 integrin complex regulates VEGF-dependant phosphorylation of Focal Adhesion Kinase (FAK). We show that the formation of this complex of receptors is associated with the recruitment of the chaperon Heat shock protein 90 (HSP90) on VEGFR2. The VEGR2/HSP90 interaction implicates the last 130 amino acids of VEGFR2 and is necessary for the activation of the RhoA small GTPase and RhoA-dependant kinase (ROCK). Then, ROCK activation triggers the direct phosphorylation of FAK on serine residue 732. In turn, phosphorylation of Ser732 changes the conformation of FAK making the tyrosine residue 407 accessible to a member of the FAK family of nonreceptor protein tyrosine kinases, the Proline rich tyrosine kinase 2 (Pyk2). In fact, we show that Pyk2 is activated in response to VEGF-dependant activation of integrin (33. These results were confirmed by the use of siRNA against ROCK and Pyk2. Phosphorylation of serine 732 and tyrosine 407 residues are both implicated in vinculine recruitment at the ventral plaques in endothelial cells in response to VEGF. Finally, by using embryonic MEF FAK-/- cells and siRNA against FAK in HUVEC, we show that the phosphorylation of these two residues is critical to promoting cell migration. Our findings underscore for the first time the complementary role played by the VEGFR2- HSP90-RhoA-ROCK-FAK-S732 and avp3-Pyk2-Y407 pathways in transducing the VEGF signal that leads to the assembly of focal adhesions and endothelial cell migration.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LAVAL/oai:corpus.ulaval.ca:20.500.11794/18198 |
| Date | 11 April 2018 |
| Creators | Le Boeuf, Fabrice |
| Contributors | Huot, Jacques |
| Source Sets | Université Laval |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | thèse de doctorat, COAR1_1::Texte::Thèse::Thèse de doctorat |
| Format | xvii, 246 f., application/pdf |
| Rights | http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 |
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