La nucléoline est une des protéines les plus abondantes des nucléoles. Ses fonctions ne sont cependant pas restreintes à la biogénèse des ribosomes. En absence de nucléoline, un phénotype d’amplification du nombre de centrosomes en mitose, associé à des fuseaux multipolaires a été récemment rapporté. Notre étude vise à comprendre l’implication de la nucléoline dans l’apparition de ce phénotype et notamment ses conséquences sur l’organisation des microtubules.Par immunofluorescence, nous mettons en évidence que la fraction centrosomale de la nucléoline est spécifiquement associée au centriole mature en interphase, alors qu’en mitose seule une forme phosphorylée y est détectée.En interphase, les cellules déplétées en nucleoline présentent une amplification de leurs centrioles immatures, entourés par un réseau anormal de péricentrine, dénotant une perte de structuration de la matrice péricentriolaire. De plus, une désorientation du réseau microtubulaire causée par une capacité de nucléation ralentie et une perte d’ancrage des microtubules au centrosome mature est observée. Par des expériences de co-immunoprécipitation avec la tubuline γ, un lien avec le complexe d’initiation de la nucléation des microtubules est dévoilé.En conclusion, les résultats de ma thèse révèlent que structurellement la nucléoline est associée au centriole mature des cellules en interphase et que fonctionnellement elle stimule la nucléation des microtubules et participe à leur ancrage au centrosome mature pour orienter le réseau microtubulaire en interphase. La nucléoline pourrait ainsi être un des acteurs de la synchronicité entre centrosomes et nucléoles pour la régulation du cycle cellulaire. / Nucleolin is an abundant non-ribosomal protein of the nucleolus. Nevertheless its functions are not restricted to ribosome biogenesis. Without nucleolin, a phenotype of abnormally high centrosome numbers was recently reported in mitosis, associated with multipolar spindle formation. The purpose of our study is to understand nucleolin’s involvement in the appearance of this phenotype and specifically consequences on microtubule network organisation. By immunofluorescence, visual evidences of a centrosomal fraction of nucleolin are provided, specifically associated with the mature centriole of interphase cells. In mitosis, only a phosphorylated form of nucleolin is detected at the spindle poles.In interphase, nucleolin depleted cells exhibit immature centriole amplification surrounded by an abnormal mesh of pericentrine, showing a loss of pericentriolar matrix structuration. Furthermore, in most nucleolin depleted cells, a complete disorganisation of microtubule network is observed, caused by a slower microtubule nucleation capacity and a loss of microtubule anchoring at the mature centriole. Using co-immunoprecipitation with γ-tubulin, a major centrosomal protein, a link with the microtubule nucleation complex was highlighted.Taken together my thesis results reveal that in interphase cells, nucleolin is structurally associated with the mature centriole, and functionally stimulates microtubule nucleation and participates in their anchoring at the mature centrosome to orient microtubule network. Thus, nucleolin could be a major actor in the synchronicity between centrosome and nucleoli for cell cycle regulation.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:theses.fr/2014ENSL0890 |
| Date | 28 April 2014 |
| Creators | Gaume, Xavier |
| Contributors | Lyon, École normale supérieure, Bouvet, Philippe |
| Source Sets | Dépôt national des thèses électroniques françaises |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation, Text |
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