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Previous issue date: 2005-07-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Passiflora edulis f. flavicarpa é considerada a espécie mais importante do gênero Passiflora, principalmente pelo seu interesse botânico, comercial e em programas de melhoramento. Análises citogenéticas desta espécie revelaram número cromossômico de 2n=18, porém, a caracterização de seus cromossomos tem sido apresentada na literatura com dados conflitantes quanto à posição do centrômero, ao número e localização de constrições secundárias e de regiões organizadoras de nucléolo (RONs). Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi adaptar metodologias que ampliassem a resolução das análises cromossômicas em P. edulis f. flavicarpa. Mais especificamente, aplicar técnicas citogenéticas convencionais e moleculares para determinar os aspectos morfológicos dos cromossomos e identificar as RONs. Os meristemas radiculares foram pré-tratados com o bloqueador mitótico Amiprofos metil (APM), 3 μM, durante um período de 16 horas à 4 oC e fixados. As preparações citogenéticas foram realizadas pela técnica de dissociação celular e secagem ao ar e submetidas à coloração convencional com Giemsa, à coloração com o fluorocromo laranja de acridina e à metodologia de FISH (Fluorescent in Situ Hybridization). As figuras cromossômicas foram observadas com objetiva de imersão e capturadas diretamente por uma videocâmera acoplada ao microscópio e a um computador. O bloqueador mitótico utilizado, juntamente com a técnica aplicada, proporcionou acúmulo de células prometafásicas e metafásicas adequadas para análise. Visualizaram-se nove pares de cromossomos bem espalhados nas lâminas, sem sobreposição e com constrições primárias e secundárias definidas, facilitando assim a montagem dos cariogramas. As análises do cariótipo revelaram comprimento médio dos cromossomos metafásicos de 3,75 μm (par 1) a 2,20 μm (par 9) e razões de braços indicando que os cromossomos de 2 a 7 são metacêntricos e o 1, 8 e 9 são submetacêntricos. Observou-se a presença de constrição secundária na porção subterminal do braço longo dos cromossomos 1 e 8 e porção subterminal do braço curto dos cromossomos 2 e 7, sendo que, na literatura, o número dessas constrições variou de um a três em preparações obtidas pela técnica de esmagamento. Com o fluorocromo laranja de acridina, foram observadas regiões emitindo fluorescência verde-amarelada no braço curto do cromossomo 7 e no braço longo do cromossomo 8, evidenciando dois cromossomos que apresentaram constrição secundária. A técnica de FISH, com a utilização de sonda de rDNA 18S, revelou quatro marcações fluorescentes em núcleos interfásicos e marcações fluorescentes nos mesmos pares cromossômicos marcados com laranja de acridina, em metáfase. As marcações obtidas com o fluorocromo correspondem em número e localização dos sítios de rDNA 18S, indicando que somente duas das quatro constrições secundárias encontradas com a coloração de Giemsa estão relacionadas com RON. Assim, considerando que diferenças intraespecíficas e de ecotipos não estejam envolvidas nas diferenças morfológicas pesquisadas, as metodologias aplicadas corroboraram a ampliação da resolução do cariótipo de P. edulis f. flavicarpa. Evidenciou-se, portanto, diferenças na posição do centrômero, número e localização das constrições secundárias e das RONs, quando comparadas aos resultados encontrados na literatura. / Passiflora edulis f. flavicarpa is considered the most important species from the genus Passiflora, mainly because of its botanical and commercial interests, as well as for breeding programs. Cytogenetical analyses of this species have revealed a chromosomic number of 2n=18, however, its chromosome characterization in the literature has been conflicting concerning the centromere position, the number and localization of secondary constrictions and of nucleolus organizer regions (NORs). In this context, the goal of the present work was to adapt methodologies that would amplify the resolution of the chromosomic analyses in P. edulis f. flavicarpa. More especifically, to apply conventional and molecular cytogenetical techniques in order to determine the morphological aspects of the chromosomes and identify the NORs. Root meristems were pre-treated with the mitotic blocker Amiprophos-methyl (APM), 3 μM, for 16 h at 4 °C and then fixated. The cytogenetic preparations were done using the cell dissociation and air-drying technique, followed by the conventional staining with Giemsa, staining with the fluorochrome Acridine Orange and the FISH (Fluorescent in Situ Hybridization) methodology. The chromosomic figures were observed with objective of immersion lenses and captured directly by a videocamera connected to the microscope and to a computer. The employed mitotic blocker, associated to the applied technique, provided the accumulation of prometaphase and metaphase cells adequate to analysis. It was possible to visualize nine pairs of chromosomes well-dispersed on the slides, without overlapping and showing well defined primary and secondary constrictions, so enabling the easier assembly of the xkaryograms. Analyses of the karyotype revealed a mean metaphasic chromosome length ranging from 3.75 μm (pair 1) to 2.20 μm (pair 9) and arm ratios indicating that the chromosomes from 2 to 7 are metacentric, while 1, 8 and 9 are submetacentric. The presence of secondary constrictions was observed on the subterminal portion of the long arm of chromosomes 1 and 8, and on the subterminal portion of the short arm of chromosomes 2 and 7, while in the literature, the number of these constrictions varied from one to three in preparations obtained with the squash technique. With the fluorochrome Acridine Orange, regions were observed emitting green-yellowish fluorescence on the short arm of chromosome 7 and on the long arm of chromosome 8, this way evidencing two chromosomes which presented secondary constriction. The FISH tecnnique, with use of 18S rDNA probe, revealed four fluorescent marks in interphasic nuclei and fluorescent marks on the same chromosome pairs marked in metaphase with Acridine Orange. The marks obtained with the fluorochrome correspond in number and position of the 18S rDNA sites, thus indicating that only two of the four secondary constrictions identified with the Giemsa coloration are related to NOR. Hence, considering that intraspecific and ecotype differences are not involved in the researched morphological differences, the applied methodologies reasserted the resolution amplification of the P. edulis f. flavicarpa karyotype. Therefore, differences on the centromere position, number and localization of the secondary constrictions and of the NORs were verified, when compared to results found on the literature.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:localhost:123456789/10534 |
| Date | 15 July 2005 |
| Creators | Praça, Milene Miranda |
| Contributors | Saraiva, Luiz Sérgio, Otoni, Wagner Campos, Bruckner, Cláudio Horst, Carvalho, Carlos Roberto de |
| Publisher | Universidade Federal de Viçosa |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFV, instname:Universidade Federal de Viçosa, instacron:UFV |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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