The need to preserve the stability of saliva samples during and/or after collection has been considered a factor that might influence its analytical results, compromising the reliability and reproducibility of these analytical methods. The main challenges related to saliva preservation include the complexity of saliva composition, and its inherent elevated proteolitic activity. Thus, collection and storage of saliva requires specific precautions to preserve its components. The present study aimed to evaluate the protein concentration of saliva samples obtained from 10 healthy adults, aged 23 â 65 years, with a mean age of 31 years, subject to different pre-analytical sample preparation. Following collection, the salivary flow rate was calculated, and saliva samples from each volunteer were fractioned and divided in six different groups, in which each of these groups corresponded to a different type of pre-analytical sample preparation. The groups were as follows: G1- immediate centrifugation, no addition of protease inhibitor, room temperature during 24 hours; G2- immediate centrifugation, no addition of protease inhibitor, -80oC during 30 days; G3- immediate centrifugation, protease inhibitor added during collection, -80oC during 30 days; G4- immediate centrifugation, protease inhibitor added during analysis, -80oC during 30 days; G5- centrifugation 30 days after collection, no addition of protease inhibitor, -80oC during 30 days; G6- centrifugation 30 days after collection, protease inhibitor added during analysis, -80oC during 30 days. Total protein concentration was analyzed in duplicates, through the bicinchoninic acid assay. After analysis, the total protein concentration in each group was statistically correlated through Pearson and Spearman correlation tests and compared using repeated measure ANOVA (p<0.05). The mean total protein concentrations showed a negative correlation with salivary flow rate in G1 (P= 0,020), G4 (P= 0,027) and G5 (P= 0,05). Total protein concentration and age were only statistically correlated in G3 (P= 0,01). The mean total protein concentrations did not significantly differ between groups, F(5,45)= 1,132, P= 0,358. These results were also observed when comparing the mean total protein concentrations normalized by each individualâs salivary flow rate, F(5,45) = 2,068, P= 0,087. In conclusion, the methodological alterations proposed for the preparation of saliva samples before analysis did not generate significant quantitative alterations in total protein concentration within these samples. / A necessidade de preservar a estabilidade da saliva durante e/ou depois da coleta, tem sido considerado um fator que pode influenciar os resultados obtidos na anÃlise desse fluido, comprometendo a confiabilidade e reprodutibilidade de tais mÃtodos analÃticos. Os principais desafios relacionados à preservaÃÃo da saliva referem-se à complexidade da sua composiÃÃo e da sua elevada atividade proteolÃtica inerente. Consequentemente, coleta e armazenamento da saliva exigem precauÃÃes especiais para preservaÃÃo de seus componentes. O presente estudo se propÃs a avaliar a concentraÃÃo proteica de amostras de saliva total de dez voluntÃrios adultos, saudÃveis, com idades variando de 23 a 65 anos, com mÃdia de 31 anos submetidas a alteraÃÃes metodolÃgicas no preparo prÃ-analÃtico da amostra. ApÃs coletadas, os fluxos salivares foram calculados e as amostras de saliva de cada indivÃduo foram fracionadas e divididas em seis diferentes grupos, onde cada um desses grupos correspondeu a um tipo diferente de preparo prÃ-analÃtico da amostra. Os grupos foram conforme segue: G1- centrifugaÃÃo imediata, inibidor ausente, temperatura ambiente por 24 horas; G2- centrifugaÃÃo imediata, inibidor ausente, -80oC por 30 dias; G3- centrifugaÃÃo imediata, inibidor no ato da coleta, -80oC por 30 dias; G4- centrifugaÃÃo imediata, inibidor no ato da anÃlise, -80oC por 30 dias; G5- centrifugaÃÃo apÃs 30 dias, inibidor ausente, -80oC por 30 dias; G6- centrifugaÃÃo apÃs 30 dias, inibidor no ato da anÃlise, -80oC por 30 dias. As concentraÃÃes de proteÃnas totais foram avaliadas pelo mÃtodo do Ãcido bicinconÃnico, em duplicatas. ApÃs anÃlise a concentraÃÃo de proteÃnas totais em cada grupo foi estatisticamente correlacionada pelos testes de Pearson e Spearman, e comparaÃÃes feitas realizadas por meio do teste ANOVA para medidas repetidas (p<0.05). As concentraÃÃes mÃdias de proteÃnas totais demonstraram uma correlaÃÃo negativa significativa com o fluxo salivar em G1 (P= 0,020), G4 (P= 0,027) e G5 (P= 0,05). ProteÃnas totais e idade sà demonstraram correlaÃÃo significativa em G3 (P= 0,01). As concentraÃÃes de proteÃnas totais mÃdias nÃo diferiram de forma significante entre os grupos, F(5,45)= 1,132, P= 0,358. Esses resultados foram, tambÃm, observados ao se comparar as mÃdias de proteÃnas totais com base no fluxo salivar dos voluntÃrios, F(5,45) = 2,068, P= 0,087. Em conclusÃo, as alteraÃÃes metodolÃgicas ora propostas no tratamento das amostras de saliva nÃo redundaram em alteraÃÃes quantitativas significantes nas concentraÃÃes de proteÃnas totais presentes nesse fluido.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:9542 |
| Date | 29 May 2015 |
| Creators | IÃda Maria Rocha Lima Vieira da Fonseca |
| Contributors | Cristiane SÃ Roriz Fonteles, ClÃudia Ferreira Santos, Thyciana Rodrigues Ribeiro |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Odontologia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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